轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)的研究.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)的研究姓名：何光余申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：李碧春孫懷昌20030501揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文現(xiàn)腺胃腫大異常。3以人激肽釋放酶為目的基因進(jìn)行胚盤注射239枚受精卵，采用蛋殼膜封口膠封口，孵出小雞14只，孵化率為59％。對(duì)孵化后47胚齡的整胚及7胚齡后死亡雞胚的肝、腦、腎、性腺、脾、心、肺、皮膚和活雞的血液皮膚進(jìn)行檢測(cè)，斑點(diǎn)雜交陽性率為222％，對(duì)可疑陽性和出雛雞的組織器官PCR

2、檢測(cè)，陽性率為37％。其中1只1516胚齡的死胚腺胃有出血點(diǎn)，1只16胚齡的死胚肝臟異常腫大。出殼雛雞1只腳癱，不能直立。7只在發(fā)育到15左右千克食欲減退廢絕。消瘦而死，解剖發(fā)現(xiàn)膽囊腫大，肝腸部分發(fā)綠壞死。這可能與早期試驗(yàn)飼養(yǎng)狀況不好有關(guān)，而且對(duì)試驗(yàn)雞未進(jìn)行剖檢分析不能排除疾病的可能性。但也從另一方面說明胚盤顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因雞，外源基因的隨機(jī)插入可能導(dǎo)致內(nèi)源性基因的破壞或失活，也可能激活正常情況下處于關(guān)閉狀態(tài)的基因或在插入位點(diǎn)發(fā)生染

3、色體的畸變而引起個(gè)體異常。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明hGH、Klkl兩種基因均可在雞中獲得整合表達(dá)，也說明在一定的范圍內(nèi)，不同質(zhì)粒，不同片段大小的外源基因通過脂質(zhì)體包埋，利用胚盤顯微注射法均可獲得轉(zhuǎn)基因雞，胚盤顯微注射法是轉(zhuǎn)基因雞制各的一條有效途徑。4在用精子介導(dǎo)法進(jìn)行雞的轉(zhuǎn)基因研究中對(duì)雞精子的采集、稀釋、體外培養(yǎng)和基因轉(zhuǎn)染的條件進(jìn)行了摸索，轉(zhuǎn)染后的精子活力與對(duì)照組差別不顯著，PCR檢測(cè)結(jié)果證明3TC孵育1小時(shí)，精子活力良好并攜帶有外源基因。以人激肽