29797.運(yùn)用細(xì)胞膜片技術(shù)構(gòu)建預(yù)血管化組織工程移植物的實(shí)驗(yàn)研究

1、分類號(hào)：分類號(hào)：R78密級(jí)：密級(jí)：公開(kāi)研究生學(xué)位論文校址：甘肅省蘭州市校址：甘肅省蘭州市論文題目（中文論文題目（中文）運(yùn)用細(xì)胞膜片技術(shù)構(gòu)建預(yù)血管化組織工程運(yùn)用細(xì)胞膜片技術(shù)構(gòu)建預(yù)血管化組織工程移植物的實(shí)驗(yàn)研究移植物的實(shí)驗(yàn)研究論文題目（外文論文題目（外文）Developmentofprevularizedtissueengineeredgraftsusingcellsheettechnologyftissueregeneration研究生姓

2、名研究生姓名李琴學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)口腔醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)口腔正畸學(xué)口腔正畸學(xué)研究方向研究方向口腔正畸學(xué)口腔正畸學(xué)∕組織工程組織工程學(xué)位級(jí)別學(xué)位級(jí)別碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱任利玲任利玲教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2012015年7月至月至2012017年1月論文提交日期論文提交日期2012017年4月論文答辯日期論文答辯日期2012017年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期2012017年6月I運(yùn)用細(xì)胞膜片技術(shù)運(yùn)用細(xì)胞膜片技術(shù)構(gòu)

3、建預(yù)血管化組織工程移植物構(gòu)建預(yù)血管化組織工程移植物的實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)研究中文摘要中文摘要目的目的：組織工程構(gòu)建的移植物其血管網(wǎng)的形成仍是一個(gè)難題。本實(shí)驗(yàn)旨在探討完全利用兔原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BonemarrowderivedmesenchymalstemcellsBMSCs）構(gòu)建預(yù)血管化的移植物，并將該移植物植入裸鼠體內(nèi)觀察是否有功能性血管生成的可行性，從而為工程血管化提供新的構(gòu)建策略。方法方法：（1）兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rBMSCs）的

4、體外培養(yǎng)及增殖、生長(zhǎng)特征觀察：運(yùn)用全骨髓貼壁法分離rBMSCs并培養(yǎng)，傳代純化，在顯微鏡下觀察rBMSCs的生長(zhǎng)及增殖。（2）rBMSCs誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞：將增殖并傳代到第2代的rBMSCs在加入10μgL的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）和10μgL的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）兩種細(xì)胞因子的誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)培養(yǎng)2周，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及增殖、生長(zhǎng)特性，利用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)鑒定誘導(dǎo)分化后的血管內(nèi)皮樣細(xì)胞（Endothelia

5、lcellsECs）。（3）構(gòu)建預(yù)血管化細(xì)胞膜片：將傳至第2代的rBMSCs以9104∕cm2的密度接種至培養(yǎng)皿并培養(yǎng)2周得到未分化膜片，以5104∕cm2的密度將從rBMSCs誘導(dǎo)得到的ECs均勻接種至形成的未分化膜片上，加入內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)液培養(yǎng)3天，鏡下觀察細(xì)胞的分布及微血管網(wǎng)生成情況。（4）三維預(yù)血管化移植物的構(gòu)建：將在內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)液中共培養(yǎng)7天的預(yù)血管化膜片（ECsrBMSCs）用細(xì)胞刮刀輕輕刮起，用鑷子將膜片折疊三次，形成大

6、約長(zhǎng)8mm寬8mm的三維預(yù)血管化細(xì)胞膜片結(jié)構(gòu)，作為實(shí)驗(yàn)組。將未分化細(xì)胞膜片以同樣的方法折疊，形成三維的未血管化細(xì)胞膜片結(jié)構(gòu)，作為對(duì)照組。將折疊后的細(xì)胞膜片結(jié)構(gòu)放置內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時(shí)，使其成為一個(gè)整體。（5）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將孵育24小時(shí)后的兩組膜片分別植入裸鼠的背部皮下，并在術(shù)后1周、2周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行大體觀、HE染色及免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)。結(jié)果結(jié)果：（1）通過(guò)全骨髓貼壁法獲得了rBMSCs，該細(xì)胞在顯微鏡下的形態(tài)呈現(xiàn)梭形、多角