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1、宋修鵬學科專業(yè)生物絲堂皇僉王生物堂指導教師武這數(shù)援論文答辯日期201068學位授予日期20106—30答辯委員會主席魚筮塾援論文評閱人姜明國副塾拯塞嫠妲副熬援MethylobacteriumspMB200突變體庫的構(gòu)建及一碳代謝相關(guān)基因mtdA和mtdB的初步研究摘要甲基營養(yǎng)型細菌能夠利用不含CC鍵的化合物為唯一的能源和碳源,它們具有特殊的一碳代謝途徑。此類細菌可用來生產(chǎn)單細胞蛋白和氨基酸等,具有廣泛的商業(yè)價值。本研究所用的MspMB2
2、00是一株兼性的甲基營養(yǎng)菌,它能在以甲醇為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長。為更好的研究了解其一碳同化的途徑,我們利用pTnModRKm’構(gòu)建了MspMB200的部分突變體庫,共獲得突變菌株11554株,經(jīng)過進一步利用甲醇為唯一碳源的培養(yǎng)基復篩,最后篩選到333株不能利用甲醇的突變株。通過TAILPCR的方法我們對其中9株突變菌的轉(zhuǎn)座子插入基因進行了初步定位,它們分別為絲氨酸乙醛酸氨基轉(zhuǎn)移酶;亞甲基四氫甲烷蝶呤脫氫酶(mtdB);丁烯酰輔酶A還原
3、酶;乙醇脫氫酶;亞甲基四氫葉酸脫氫酶(mtdA);血管性假性血友病因子蛋白A型MxaA;蘋果酸硫激酶和假定有機溶劑性蛋白。利用pTnMod—RKm’含有復制起始位點的優(yōu)點迅速的克隆了基因mtdA和mtdB,并進行了初步的生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)基因mtdA與MpopuliBJ001的mtdA基因的一致性最高,達到95%?;騧tdB與MextorquensDM4的mtdB基因的一致性最高,達到94%。通過與表達載體pCM80連接構(gòu)建重組質(zhì)粒
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