紋腹叉鼻鲀（Arothron hispidus Linnaeus）淋巴囊腫病的研究.pdf

1、運用石蠟包埋切片法、組織化學(xué)方法和電子顯微鏡技術(shù),對紋腹叉鼻鲀的鰭上的囊腫物的組織病理結(jié)構(gòu)和組織化學(xué)性質(zhì)進行了研究.結(jié)果顯示,其囊腫物是由膨大的細胞聚集而成,細胞大小380-400μm,細胞核變得不規(guī)則,核內(nèi)染色質(zhì)邊集,細胞質(zhì)邊緣有點狀或塊狀的嗜堿性、呈Feulgen和Mann氏反應(yīng)陽性的包涵體,高電子密度的包涵體周圍有六角形的病毒粒子,直徑約200nm,是典型的虹彩病毒.細胞膜外有一厚層均質(zhì)的、呈PAS反應(yīng)陽性的包膜,這些病理組織特征

2、都是魚類淋巴囊腫病的典型特征.6月份時囊腫物已變得很小,電鏡下未看到病毒粒子,結(jié)締組織內(nèi)觀察到細胞的崩解和碎片,此時病魚正處于病愈恢復(fù)期.根據(jù)牙鲆淋巴囊腫病毒的主要核衣殼蛋白序列,建立了巢式PCR技術(shù)來檢測該病毒,其中外側(cè)引物P1和P2的擴增產(chǎn)物大小為348bp,內(nèi)側(cè)引物P3和P4的擴增產(chǎn)物的大小為172bp.敏感性實驗表明,巢式PCR要比常規(guī)PCR靈敏10<'7>倍.運用巢式PCR技術(shù),檢測了4月份和6月份的患病紋腹叉鼻鲀的囊腫物,結(jié)

3、果表明4月份的樣品有淋巴囊腫病毒,而6月份的樣品則沒有,與電鏡觀察結(jié)果一致.用該實驗室研制的鼠抗牙鲆淋巴囊腫病毒的單克隆抗體作為一抗,對紋腹叉鼻鲀的囊腫物的冰凍切片進行間接免疫熒光抗體染色,結(jié)果在熒光顯微鏡下觀察到囊腫細胞的細胞質(zhì)發(fā)出綠色熒光,而囊腫細胞的細胞核及周圍的結(jié)締組織無綠色熒光.對囊腫物冰凍切片進行免疫金-銀染色,結(jié)果顯示囊腫細胞的細胞質(zhì)呈陽性黑色,而結(jié)締組織為陰性.這些結(jié)果都表明在囊腫細胞的細胞質(zhì)內(nèi)有淋巴囊腫病毒粒子存在.對