酶解鋸齒巴非蛤肉蛋白制備血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽的研究.pdf

1、我國南海沿岸盛產(chǎn)豐富的貝類資源，如馬氏珠母貝（Pinctada martensii）、翡翠貽貝（Perna viridis）、鋸齒巴非蛤（Paphia amabilis）等，但未得到很好的加工利用。本研究主要探討以這些貝肉蛋白為原料，制備血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽（ACEIP）的可行性及工藝條件，為南海貝類高附加值的加工利用提供新的開發(fā)途徑及理論依據(jù)。 本研究選用胃蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶為實(shí)驗(yàn)用酶，在各種

2、酶的最佳反應(yīng)溫度和最適pH條件下，分別對(duì)馬氏珠母貝、翡翠貽貝、鋸齒巴非蛤肉進(jìn)行單一酶解實(shí)驗(yàn)，在酶解時(shí)間為4h、8h、12h、24h時(shí)測(cè)定酶解液對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）活性的抑制率，篩選出最佳實(shí)驗(yàn)用酶和最佳實(shí)驗(yàn)原料。用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)酶解條件進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳酶解條件并在該條件下制備酶解液。經(jīng)超濾除去酶解液中的底物殘?jiān)痛蠓肿游镔|(zhì)，采用葡聚糖凝膠（G-25）層析法分析比較超濾前后酶解液的分子量分布，并用氨基酸自動(dòng)分析儀分析高活性ACEIP組

3、分的氨基酸組成。 研究結(jié)果： 1、成功地從豬肺中提取了可滿足本研究用的ACE，比活力為53.4U/mg；該酶在–20℃條件下保存3個(gè)月，活力保持率為90.17％。 2、對(duì)不同原料進(jìn)行了單一酶解實(shí)驗(yàn)，篩選出胃蛋白酶和胰酶為最佳實(shí)驗(yàn)用酶、鋸齒巴非蛤肉為最佳實(shí)驗(yàn)原料。 3、采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)鋸齒巴非蛤肉雙酶水解條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了制備ACEIP的酶解條件為：在胃蛋白酶的最佳作用條件（溫度37℃、pH2.2）反應(yīng)3

4、h后，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的溫度和pH到胰酶的最佳作用條件（溫度50℃、pH7.0）下繼續(xù)反應(yīng)1h；底物濃度為8％；胃蛋白酶和胰酶的用量分別為40.82萬單位/g底物、34.8萬單位/g底物。 4、酶解液超濾前后的比較：超濾前酶解液抑制ACE活性的IC50為0.672 mg/mL，分子量在9300Da以下，可溶性蛋白濃度為4.94 mg/mL；超濾后酶解液抑制ACE活性的IC50為0.584 mg/mL，分子量在1300Da以下，可溶性