1909.胞外hmgb1調(diào)控p53表達在t淋巴細胞中的作用及機制

1、llvlllLl[／3llllll2lllll6llLIllIlllLOUllll7llLH2IIII單位代碼10602學號20140llll8分類號R34密級公開國＼o：：／屋彩印徑尤路稚尤背aUANGXlNORMALU～IVE宙SiTV碩士學位論文胞外HMGBl調(diào)控p53表達在T淋巴細胞中的作用及機制TheRoleandMechanismofExtracellularHMGBlRegulatedp53ExpressioninTLym

2、phocytes學院：專業(yè)：研究方向：年級：研究生：指導教師：完成日期；生命科學學院生物學生物化學與分子生物學2014級賈敏童亞林20174fUlllIFIIrr／llllllfl／llIlrf1111IlllfY3261072胞外HMGBl誘導p53表達在T淋巴細胞中的作用及機制研究生：賈敏年級：2014級導師：童亞林學科專業(yè)：生物化學與分子生物學研究方向：重大疾病分子機理摘要目的1)明確高遷移率蛋白族BI(hi【曲mobilityg

3、roupbox一1protein，HMGBl)對T淋巴細胞增殖的影響。2)探究HMGBl對p53(tumorprotein53，p53)表達的影響。3)通過于擾p53表達，明確p53在介導HMGBl對T淋巴細胞增殖抑制的作用，并進一步探討p53在tlMGBI誘導的T淋巴細胞凋亡和功能紊亂中的作用。4)檢測絲裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase，MAPKs)通路活性以探索HMGBl誘導p53表達的可

4、能機制。5)利用特異性p38抑制劑，明確p38信號通路在HMGBl誘導p53活化中的作用。方法1)根據(jù)細胞培養(yǎng)時間將Jurkat細胞分為0(正常組)、12、24、48h培養(yǎng)組，將100ng／mlHMGBl加入培養(yǎng)基后培養(yǎng)相應(yīng)時間；根據(jù)細胞培養(yǎng)時加入HMGBl濃度將Jurkat細胞分為0(正常組)、10、100、1000ng／ml組，加入相應(yīng)濃度HMGBl連續(xù)培養(yǎng)24h。采用CCK8法檢測各組Jurkat細胞增殖情況，熒光定量一聚合酶鏈反

5、應(yīng)(RT—PCR)檢測細胞樣本中p53、p21及泛素蛋白酶小鼠雙微體蛋白(murinedoubleminute2，mdm2)mRNA表達水平，Westernblot檢測磷酸化p53及p53、p21、mdm2的蛋白表達水平。2)將載有p53shRNA表達質(zhì)粒和空白載體的慢病毒轉(zhuǎn)染入Jurkat細胞中。加入嘌呤霉素對細胞進行篩選，建立穩(wěn)定表達細胞株。將以上2種細胞分別分為對照組和HMGBl組，加入100ng／mlHMGBl培養(yǎng)24h。CCK

6、8法檢測細胞增殖，RT—PCR、Westernblot法分別檢測細胞樣本中p53mRNA、磷酸化p53和p53蛋白的表達水平；提取細胞核蛋白后檢測活化T細胞核因子(nuclearfactorofactivatedTcells，NFAT)活性；留取上清采用ELISA法檢測細胞因子IL2、IL一4、IFN吖的水平：將細胞用AnnxinV／7一AAD染色后，利用流式細胞儀分析凋亡細胞比率，并檢測凋亡相關(guān)因子B淋巴細胞瘤一2(Bcelllymp