16569.轉(zhuǎn)錄中介體控制體內(nèi)基因的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄水平的分子機(jī)理

1、轉(zhuǎn)錄中介體控制體內(nèi)基因的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄水平的分子機(jī)理中文摘要轉(zhuǎn)錄中介體Mediator是一個(gè)在進(jìn)化上高度保守的，由多個(gè)蛋白組成的復(fù)合物。它能夠?qū)⑥D(zhuǎn)錄激活因子或抑制因子控制的調(diào)控信號(hào)傳遞給PolII通用轉(zhuǎn)錄機(jī)器。眾多數(shù)據(jù)證明轉(zhuǎn)錄中介體在基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的多個(gè)步驟都具有重要作用，包括轉(zhuǎn)錄招募、起始和延伸，但它調(diào)控轉(zhuǎn)錄延伸的具體機(jī)制仍未被完全闡釋。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄中介體的MED23亞基能夠與延伸因子PTEFb的CDK9亞基發(fā)生直接相互作用

2、，影響Egrl基因的轉(zhuǎn)錄延伸，從而調(diào)控Egrl基因的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄水平。在非刺激的情況下，野生型的ES細(xì)胞中Egrl基因維持著一個(gè)本底水平的表達(dá)，但在Med23√一的細(xì)胞中，Egrl的本底水平比野生型細(xì)胞下降大約5倍。通過(guò)染色質(zhì)免疫沉淀的方法我們發(fā)現(xiàn)，在WT及Med23√一細(xì)胞中，Egrl的啟動(dòng)子上都結(jié)合有等同數(shù)量的PIE(包含PolII及通用轉(zhuǎn)錄因子GTFs)，Mediator和轉(zhuǎn)錄激活因子ELKl的結(jié)合也幾乎一致。但Med23的敲除使Po

3、lII(Ser2P)在Egrl編碼區(qū)的結(jié)合大大減少。與之相一致的是，我們發(fā)現(xiàn)Egrl基因啟動(dòng)子上結(jié)合的CDK9在K0細(xì)胞中也少于WT細(xì)胞。進(jìn)一步，我們用體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證明了Med23直接和CDK9發(fā)生蛋白間相互作用。我們的這些發(fā)現(xiàn)對(duì)“Mediator如何控制PolII從轉(zhuǎn)錄起始進(jìn)入轉(zhuǎn)錄延伸這個(gè)問(wèn)題”從機(jī)制上進(jìn)行了深入的闡釋。目錄中文摘要IAbstract。。。II目錄III1引言12材料和方法621實(shí)驗(yàn)材料6211試劑6212抗體621