農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化棉花過(guò)程中畸形苗發(fā)生機(jī)理的研究.pdf

1、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化棉花是目前棉花轉(zhuǎn)基因的最主要的方法,但用此法轉(zhuǎn)化棉花后誘導(dǎo)成苗的過(guò)程中90﹪以上為畸形苗,這已成為棉花轉(zhuǎn)基因的瓶頸,嚴(yán)重制約著轉(zhuǎn)基因效率.該研究采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化棉花纖維改良基因,得到抗卡那霉素植株,PCR驗(yàn)證纖維改良基因已成功轉(zhuǎn)入棉花.優(yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化棉花的主要技術(shù)參數(shù),拓寬了棉花基因型范圍,建立了四個(gè)棉花品種的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系.研究發(fā)現(xiàn)采用嫁接技術(shù),可使轉(zhuǎn)基因植株成活率達(dá)到90﹪以上,可有效提高轉(zhuǎn)化成效.對(duì)棉花

2、胚狀體染色體制片技術(shù)進(jìn)行了大量研究,摸索出了適合棉花胚狀體染色體制片的流程.染色體觀察發(fā)現(xiàn)不同品種的胚狀體均存在染色體變異,且以染色體數(shù)目介于27~52條的非整倍變異細(xì)胞為最多,不同品種的染色體變異率差別很大,胚胎發(fā)生能力弱的品種染色體變異率高.轉(zhuǎn)化后采用平行實(shí)驗(yàn)得到不同品種的不同培養(yǎng)體系的愈傷組織、胚性愈傷組織、胚狀體、類胚狀體、畸形苗和正常苗,以最終正常苗誘導(dǎo)率高的體系的材料作為正常苗的發(fā)生過(guò)程,以誘導(dǎo)率低的作為畸形苗的發(fā)生過(guò)程,即

3、分為正常苗的發(fā)生過(guò)程,愈傷組織——球型胚狀體——心型胚狀體——魚(yú)雷型胚狀體階段——子葉型胚狀體——正常苗;畸形苗的發(fā)生過(guò)程,愈傷組織——類球型胚狀體——類心型胚狀體——類魚(yú)雷型胚狀體階段——類子葉型胚狀體——畸形苗.以測(cè)量大田種子形成過(guò)程和種子萌發(fā)過(guò)程中內(nèi)源激素的動(dòng)態(tài)變化做參照系,測(cè)量?jī)稍偕绨l(fā)生過(guò)程的不同發(fā)育時(shí)期的內(nèi)源激素的動(dòng)態(tài)變化,結(jié)果表明,黃綠色的胚性愈傷組織與球型胚為棉花體細(xì)胞胚胎發(fā)生的兩個(gè)關(guān)鍵時(shí)期,亦是兩個(gè)轉(zhuǎn)折點(diǎn);畸形苗發(fā)生過(guò)