13490.表達單克隆抗體的重組cho細胞篩選

1、分類號：Q8131密級：UDC：指導教師姓名：華東理工大學學位論文表達單克隆抗體的重組CHO細胞篩選張存超譚文松教授華東理工大學實驗18樓1015室申請學位級別：碩士論文定稿日期：20120216論文答辯日期：20120220學位授予單位：華東理工大學，，‘t，，、‘r^n學位授予日期：刪jj≮ujJ‘lH答辯委員會主席：評閱人：周燕教授張毅研究員張旭副教授蔡海波教授葉朝陽副教授華SJ匣zr_大學碩士學位論文第1頁表達單克隆抗體的重組C

2、HO細胞篩選摘要單克隆抗體廣泛應用于生物學和醫(yī)學領域，具有重要的社會和經(jīng)濟價值。然而由于生產(chǎn)所用細胞株表達水平和生產(chǎn)規(guī)模的限制，目前單克隆抗體的產(chǎn)能尚不能滿足日益增長的市場需求?？贵w表達所用細胞株的產(chǎn)物表達水平是限制抗體產(chǎn)量的重要因素?；虮磉_的異質(zhì)性導致不同細胞株抗體比生產(chǎn)速率表現(xiàn)出異質(zhì)性，這使得通過細胞篩選獲得高產(chǎn)細胞株成為可能。本文以表達單克隆抗體的重組CHO細胞為研究對象，使用有限稀釋法從2450個克隆中篩選獲得高產(chǎn)細胞株NO1

3、50和NO213，在HycloneSFM4CHO無血清培養(yǎng)基中進行了批次培養(yǎng)，兩者抗體產(chǎn)量分別比母細胞株(對照)增加了130％和247％。通過研究這兩株細胞的代謝副產(chǎn)物、細胞株穩(wěn)定性和表達抗體的質(zhì)量發(fā)現(xiàn)，在批次培養(yǎng)中細胞株NO213最大乳酸產(chǎn)量為227mmol／L，比細胞株NO150降低56mmol／L，乳酸對葡萄糖的得率與對照相比降低了273％，穩(wěn)定性亦優(yōu)于細胞株NO150和對照。產(chǎn)物質(zhì)量方面，兩株細胞表達的抗體均無二聚體，其分子量和

4、抗體的抗原結(jié)合力與對照無顯著差異。將篩選出的細胞株NO213在2L反應器中進行批次培養(yǎng)，其最大活細胞密度可達514x105cells／mL，最大抗體產(chǎn)量達1972mg／L，活細胞密度對時間的積分(IVCC)為168109cellsday／L，分別比對照提高了321％、240％和500％。通過本文研究工作，獲得了抗體產(chǎn)量和穩(wěn)定性較好的細胞株，且其表達的抗體質(zhì)量與對照相比無顯著差異。本研究為后續(xù)培養(yǎng)基和培養(yǎng)工藝優(yōu)化提供了較好的細胞株，為最終