小麥胚乳貯藏蛋白的免疫化學(xué)測定和定位研究.pdf

1、本研究利用小麥胚乳低分子量谷蛋白亞基、總醇溶蛋白和α-、β-、γ-、ω-醇溶蛋白六種多克隆抗體，建立了適宜的間接酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)，對不同施肥條件下小麥籽粒貯藏蛋白進行了免疫化學(xué)測定，研究了不同氮肥施加量對小麥胚乳貯藏蛋白含量的影響，發(fā)現(xiàn)隨著施肥量的增加高蛋白含量小麥胚乳貯藏蛋白含量有較為明顯地增加，而低蛋白含量的小麥胚乳貯藏蛋白含量的增加趨勢則較小，且過高的施肥量反而導(dǎo)致蛋白含量的降低。通過對不同親本及其雜交F1小麥籽粒

2、胚乳貯藏蛋白變化規(guī)律的研究，發(fā)現(xiàn)以高蛋白含量小麥作母本，有利于蛋白含量性狀的轉(zhuǎn)育；普通小麥品種與其近緣種屬的雜交后代的雜交優(yōu)勢較為明顯，后代蛋白含量超親現(xiàn)象較為普遍。通過對抗體與小麥品質(zhì)性狀相關(guān)性的研究，發(fā)現(xiàn)低分子量谷蛋白亞基、總醇溶蛋白和β-醇溶蛋白三種抗體與小麥蛋白含量、面團形成和穩(wěn)定時間、面粉沉淀值等品質(zhì)性狀的相關(guān)程度較高，而其余三種抗體則與被測品質(zhì)性狀無明顯相關(guān)關(guān)系。建立了適宜的熒光免疫定位法，對花后不同發(fā)育時期小麥胚乳貯藏蛋白

3、進行了免疫熒光定位，發(fā)現(xiàn)開花后5天的小麥胚乳細胞中沒有貯藏蛋白；花后10天的小麥胚乳細胞中貯藏蛋白已經(jīng)開始合成和積累；且低分子量谷蛋白亞基的合成和積累貫穿于小麥籽粒胚乳細胞的整個發(fā)育過程，而醇溶蛋白的合成和積累則主要集中在花后20天內(nèi)；不同種類貯藏蛋白在不同發(fā)育時期有著不同的合成積累數(shù)量，其中總醇溶蛋白數(shù)量最多，β-醇溶蛋白次之，低分子量谷蛋白亞基數(shù)量最少；各種醇溶蛋白在花后10天的合成積累量則按照β-、γ-、α-、ω-的順序依次減少。

4、 建立了適宜的免疫膠體金定位法，對花后不同發(fā)育時期小麥胚乳貯藏蛋白進行了免疫膠體金定位，驗證了本實驗中免疫熒光定位得出的有關(guān)胚乳貯藏蛋白合成時間和合成積累規(guī)律的結(jié)論。通過對花后10天小麥胚乳細胞醇溶蛋白的定位研究，驗證了粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、蛋白體等亞細胞結(jié)構(gòu)參與了醇溶蛋白的合成、積累和運輸，并首次發(fā)現(xiàn)一些液泡也參與了該過程；證實了醇溶蛋白由粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到蛋白體的運輸途徑，發(fā)現(xiàn)了以從液泡到蛋白體為最終運輸方式的另一運輸途徑；同