紅鰭東方鲀性別相關分子標記的篩選及數(shù)量形態(tài)特征比較.pdf

1、紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）為我國北方地區(qū)的優(yōu)良海水經(jīng)濟魚類之一。近年來，對紅鰭東方鲀?nèi)后w遺傳多樣性以及家系構建和培育等方面的研究逐漸增多，然而，與其性別有關的研究成果很少。本文運用多種方法對紅鰭東方鲀的性別進行研究。首先，本文對魚類性別相關基因和分子標記的研究現(xiàn)狀進行概述，為紅鰭東方鲀性別相關分子標記的篩選提供可行方案。緊接著，概括了魚類閾性狀選育的研究進展，為紅鰭東方鲀抗逆家系的選育擴展思路。其次，本文利用擴增片

2、段長度多態(tài)性（AFLP）和微衛(wèi)星(SSR)標記技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記，期望通過現(xiàn)代分子生物學技術在其早期生長階段辨別雌、雄魚，篩選出雄性魚種養(yǎng)殖，對提高紅鰭東方鲀養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益和市場價值有重要的現(xiàn)實意義，也為其性別決定機制和性別相關基因的研究奠定基礎。最后，本文基于紅鰭東方鲀的形態(tài)指標，采用多元統(tǒng)計分析方法對紅鰭東方鲀的雌、雄差異進行分析，建立鑒別雌、雄差異的數(shù)學模型，旨在為紅鰭東方鲀繁育和選育過程中雌、雄性別的鑒別提供方

3、法和理論依據(jù)。
　　本研究的主要實驗結果如下：
　　1、利用擴增片段長度多態(tài)性（AFLP）技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記。用紅鰭東方鲀雌、雄各5個個體篩選16對AFLP引物組合。在大約800bp處，引物組合（E+2-3，M+2-4）在5個雄性個體中都擴增出條帶，而在5個雌性群體中均未擴增出條帶。其它15個選擇性擴增引物組合在雌、雄各5個個體中沒有擴增出性別特異性條帶。引物篩選結果顯示，只有一個引物組合可以作為紅鰭東方鲀

4、性別相關的候選引物組合。該引物組合在紅鰭東方鲀雌、雄各30個個體中的擴增情況表明，在800bp附近處，在個體DNA水平上不存在雌、雄差異，因此，該候選條帶不是紅鰭東方鲀性別相關AFLP標記。嘗試選擇其它DNA標記技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記。
　　2、利用微衛(wèi)星 DNA標記技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記。用雌、雄各30個個體構建雌、雄基因池，利用66對微衛(wèi)星引物掃描雌、雄基因池。在雌、雄基因池中擴增出差異條帶的引物有

5、8對。用兩個各包括30個雌、雄個體的群體對這8對引物進行兩輪個體驗證。結果顯示：引物f383在雌性群體中只有極個別(3/30)個體中擴增出條帶，在雄性群體30個體中有23個個體擴增出條帶。引物f383經(jīng)過2個紅鰭東方鲀?nèi)后w共120個個體的驗證，在雌、雄個體中擴增出的條帶都出現(xiàn)差異極顯著的結果，差異等位基因片段在60個雌性個體中出現(xiàn)10次，頻率很低，為16.7％；而在雄性60個個體中出現(xiàn)51次，頻率極高，為85.0%。由此可知，引物f38

6、3該位點的差異片段對紅鰭東方鲀的性別極具雄性偏好性，該位點應該與紅鰭東方鲀性別決定區(qū)域存在相關關系。對性別差異條帶切膠回收、克隆和測序后，通過Blast比對，搜索這條序列的同源序列，結果表明這條序列為公布的紅鰭東方鲀第19號染色體上的一段，同源性高達98%，序列的覆蓋率達100%。
　　3、文本不僅用分子生物學的方法鑒別紅鰭東方鲀的性別，而且采用多元統(tǒng)計分析方法對紅鰭東方鲀的雌、雄差異進行分析。以紅鰭東方鲀雌、雄群體（72尾）的1

7、7個比例性狀為分析對象進行研究，主成分分析結果顯示，主成分分析獲得三個主成分，貢獻率分別為46.776%、27.668%和7.122%，3個主成分的積累貢獻率為81.566%，大多數(shù)雌、雄魚在三個主成分構成的三維空間中能分開。逐步判別分析結果顯示，篩選出2個比例性狀，即體寬/體長、體周長2/體長，建立了紅鰭東方鲀的雌雄判別模型，對雌雄個體的判別準確率為81.9%。用38尾紅鰭東方鲀樣本進行驗證，準確率達84.2%。方差分析結果顯示，體寬