以HBc顆粒為呈現(xiàn)載體的豬囊蟲(chóng)疫苗的構(gòu)建及其免疫學(xué)研究.pdf

1、囊蟲(chóng)病是一種常見(jiàn)的寄生蟲(chóng)病，主要在拉美、非洲、亞洲流行，嚴(yán)重危害經(jīng)濟(jì)和人類(lèi)健康。由于該病是人畜共患病，豬是中間宿主，研發(fā)有效的疫苗是解決豬囊尾蚴病的重要途徑。 有關(guān)豬囊蟲(chóng)病疫苗的研制有許多方法，包括蟲(chóng)體來(lái)源的天然抗原或重組抗原，蛋白亞單位疫苗，以及核酸疫苗。在研究寄生蟲(chóng)疫苗時(shí)，保護(hù)性抗原是最重要的因素。本研究選擇了三個(gè)保護(hù)性抗原表位KETcl，KETcl2和GK-1(簡(jiǎn)稱(chēng)為n1，n2，n3)用于設(shè)計(jì)抗囊蟲(chóng)病疫苗。 許多研

2、究證明乙肝病毒核心蛋白(HBc)可作為載體攜帶外源表位。HBc顆粒能接受外源多肽表位的插入，并在原核和真核表達(dá)系統(tǒng)中均能保持正確的折疊和自我裝配能力。它不僅能強(qiáng)烈誘導(dǎo)B細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞及細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的免疫反應(yīng)，且能使插入的多肽表位發(fā)揮其免疫特性。 由于以上知識(shí)，我們構(gòu)建了以HBc為載體的重組融合表達(dá)質(zhì)粒pET28a-△c-3n，編碼截短的HBc(1-149位)，在HBc的刺突部位第78-79位之間插入表位n1和n2，在14

3、9位之后加上表位n3。SDS-PAGE證明IPTG誘導(dǎo)后，在大腸桿菌中高效表達(dá)目的蛋白，命名為抗豬囊蟲(chóng)病疫苗△c-3n。用割膠法純化融合蛋白，電泳顯示為單一條帶。在非完全變性條件下，研究融合蛋白的電泳行為，結(jié)果表明△c-3n蛋白能形成多聚物。電鏡證實(shí)了該融合蛋白能自發(fā)聚合成顆粒。 將純化的△c-3n疫苗免疫小鼠，ELISA法測(cè)定其體液免疫效果。結(jié)果表明在免疫鼠中誘導(dǎo)出了高滴度特異性抗體，且IgG1和IgG2a同時(shí)升高，顯示該疫苗