藥物與蛋白質(zhì)的相互結(jié)合作用研究及應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)是生命系統(tǒng)中的基本物質(zhì)，在生物的生命活動(dòng)中起著極其重要的作用。任何藥物進(jìn)入生物體都需要蛋白質(zhì)的運(yùn)輸，因此研究藥物與蛋白質(zhì)的相互作用機(jī)理，建立測(cè)定蛋白質(zhì)的高靈敏度、低檢測(cè)限、簡(jiǎn)單方便的測(cè)定方法具有現(xiàn)實(shí)意義，也是當(dāng)前生物分析化學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。
　　 本文利用分子熒光法、分光光度法、1H核磁共振波譜法、傅里葉變換紅外光譜法等研究了十二種藥物與蛋白質(zhì)的相互作用機(jī)理。建立了以葉綠酸-a甲酯銅與葉綠素銅鈉為共振瑞利散射探針測(cè)定人血清

2、白蛋白含量的新方法，結(jié)果令人滿意。本文主要分為四個(gè)部分：
　　 第一部分：綜述了研究蛋白質(zhì)與藥物相互作用的研究機(jī)理和方法；論述了共振瑞利散射法定量測(cè)定蛋白質(zhì)的方法和進(jìn)展。
　　 第二部分：利用分子熒光法、分光光度法研究了25℃和37℃時(shí)五種喜樹(shù)堿類藥物：鹽酸拓?fù)涮婵?TH)，鹽酸依利替康(IH)，7-乙基喜樹(shù)堿(ECPT)，10-羥基喜樹(shù)堿(HCPT)7乙基-10羥基喜樹(shù)堿(EHCPT)與轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)的相互作用機(jī)理，

3、實(shí)驗(yàn)表明：五種喜樹(shù)堿類藥物對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白的熒光光譜均有猝滅作用，且都為單一的靜態(tài)猝滅過(guò)程。
　　 25℃時(shí)結(jié)合反應(yīng)的平衡常數(shù)K0(L·mol-1)和結(jié)合常數(shù)KB(L·mol-1)分別為K0(TH)=5.78×105，K0(IH)=4.82×104，K0(ECPT)=9.37×103，K0(HCPT)=4.01×106，K0(EHCPT)=1.027×103；KB(TH)=1.66×104，KB(IH)=7.35×104，KB(ECP

4、T)=4.22×104，KB(HCPT)=1.72×104，KB(EHCPT)=3.34×104。根據(jù)F(o)rster非輻射能量轉(zhuǎn)移機(jī)理，求算了給體(Tf)與受體(喜樹(shù)堿類藥物)間的最短作用距離r分別為：r(TH)=3.77nm，r(IH)=3.78nm，r(ECPT)=3.62nm，r(HCPT)=3.92nm，r(EHCPT)=3.42nm。通過(guò)計(jì)算反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)表明：鹽酸拓?fù)涮婵蹬cTf結(jié)合主要作用力為氫鍵和范德華力；10-羥基

5、喜樹(shù)堿與Tf結(jié)合主要作用力為靜電作用；鹽酸依利替康，7-乙基喜樹(shù)堿，7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿與Tf結(jié)合主要作用力為疏水作用。利用1H核磁共振波譜法研究了EHCPT與轉(zhuǎn)鐵蛋白作用前后的核磁共振波譜，結(jié)果表明：EHCPT與Tf相互作用時(shí)，EHCPT進(jìn)入Tf的疏水腔體中，10-OH和20-OH與Tf疏水腔體內(nèi)表面的氨基酸殘基發(fā)生相互作用，羥基發(fā)生了去質(zhì)子化反應(yīng)。
　　 第三部分研究了四種磺胺類藥物(磺胺嘧啶：SD，磺胺甲基嘧啶：SM

6、1，磺胺二甲基嘧啶：SM2，磺胺甲基異噁唑：SMZ)及磺胺增效劑(甲氧芐胺嘧啶：TMP)與牛血清白蛋白(BSA)在25℃，30℃，37℃時(shí)的熒光猝滅作用。實(shí)驗(yàn)表明：25℃時(shí)平衡常數(shù)K0(L·mol-1)為：K0(SM2)=2.31×105，K0(SM1)=6.92×104，K0(SMZ)=8.16×103，K0(TMP)=4.92×102，K0(SD)=3.32×105。結(jié)合點(diǎn)位數(shù)n分別為：n(SM2)=1.1758，n(SM1)=1.

7、0332，n(SMZ)=1.0331，n(TMP)=0.7461，n(SD)=1.2457。結(jié)合常數(shù)KB(L·mol-1)為：KB(SM2)=2.38×104，KB(SM1)=3.21×104，KB(SMZ)=3.96×103，KB(TMP)=3.67×104，KB(SD)=3.07×104。藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合距離r(nm)分別為：r(SM2)=1.85，r(SM1)=2.80，r(SMZ)=2.59，r(TMP)=2.67，r(SD)

8、=2.99。通過(guò)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)變化，表明其結(jié)合作用力類型分別為：磺胺甲基嘧啶，磺胺二甲基嘧啶，磺胺甲基異惡唑，磺胺嘧啶與BSA結(jié)合過(guò)程的主要作用力為氫鍵和范德華力。甲氧卞胺嘧啶與BSA結(jié)合過(guò)程的主要作用力為靜電作用力。同時(shí)，我們用傅里葉變換紅外光譜研究了BSA與SM1和SM2反應(yīng)前后的光譜變化，實(shí)驗(yàn)表明：加入SM1、SM2后牛血清白蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)均發(fā)生了變化。
　　 第四部分：研究了兩種卟啉類化合物作為共振光散射探針測(cè)定人

9、血清白蛋白含量的新方法。實(shí)驗(yàn)表明：葉綠素銅鈉為共振散射探針的人血清白蛋白定量分析方法的檢出限為：0.067mg/L，樣品加標(biāo)回收率為95.6[％]～102.3[％]。測(cè)定實(shí)際樣品的人血清白蛋白含量為64.82g/L，RSD為1.78[％]，同一樣品用流動(dòng)注射-抑制化學(xué)發(fā)光法與考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行了比對(duì)測(cè)定取得滿意結(jié)果。利用葉綠酸-a甲酯銅為散射瑞利探針，方法檢出限為0.0104g/L，加標(biāo)回收率為99.14[％]～103.12[％]，測(cè)定實(shí)