擬穴青蟹蛻殼與微生物組動(dòng)態(tài)變化關(guān)系的初步研究.pdf

1、擬穴青蟹是我國(guó)東南沿海重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，蛻殼是青蟹個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中普遍存在的重要現(xiàn)象，是青蟹個(gè)體不連續(xù)性增長(zhǎng)的重要標(biāo)志。研究發(fā)現(xiàn)，在青蟹蛻殼過(guò)程中，其體內(nèi)的微生物數(shù)量、群落結(jié)構(gòu)及相關(guān)的生理生化往往都會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，揭示了微生物組在青蟹蛻殼后期重建的過(guò)程，為后人進(jìn)一步的研究提供寶貴數(shù)據(jù)、奠定研究基礎(chǔ)。
　　本研究在“蟹公寓”開(kāi)展養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，獲得蛻殼后的青蟹。并對(duì)青蟹蛻殼前(重殼蟹)、蛻殼0天(即蛻殼后6h內(nèi)取樣)、蛻殼后3天、6天

2、及15天的腸道、殼內(nèi)皮、鰓組織樣品及養(yǎng)殖水體、飼喂餌料進(jìn)行取樣。對(duì)樣品中的微生物進(jìn)行了熒光顯微計(jì)數(shù)及高通量測(cè)序并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行了研究分析。主要結(jié)果如下：
　　1、使用熒光染料SYBR Green I對(duì)青蟹腸道、殼內(nèi)皮、鰓組織樣品及養(yǎng)殖水體、飼喂餌料進(jìn)行熒光顯微計(jì)數(shù)。發(fā)現(xiàn)腸道、殼內(nèi)皮、鰓組織微生物數(shù)量在蛻殼前后均發(fā)生顯著減少(P<0.05)；在蛻殼后0-15天的養(yǎng)殖過(guò)程中，青蟹微生物含量呈現(xiàn)逐漸升高趨勢(shì)；測(cè)得養(yǎng)殖水體微生物含量約為(4.

3、03±0.45)×105～(4.94±0.36)×105個(gè)/ml，餌料中微生物含量約為(5.47±0.68)×107～(8.40±0.72)×107個(gè)/g。
　　2、對(duì)高通量16S rRNA序列分析發(fā)現(xiàn)：青蟹各組織、養(yǎng)殖水體及餌料的共有優(yōu)勢(shì)菌主要為變形菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)和放線菌門(Actinobacteria)，其中變形菌門中的鹽單胞菌屬(Halomonas)占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，與

4、青蟹適應(yīng)水體鹽度環(huán)境密切相關(guān)。餌料與青蟹各組織共有優(yōu)勢(shì)菌主要為梭菌門(Fusobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)；水體特有優(yōu)勢(shì)菌主要為藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)。
　　對(duì)不同蛻殼時(shí)期青蟹組織樣品的微生物進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：青蟹體內(nèi)有些常駐菌是定植于該組織的核心菌群，但其相對(duì)豐度會(huì)隨不同蛻殼周期而發(fā)生變化。此類常駐菌在腸道樣品中有39個(gè)屬、殼內(nèi)皮組織中有46個(gè)屬、鰓組織中有74個(gè)屬。
　　3、青蟹各組織

5、微生物組成及結(jié)構(gòu)在蛻殼前后會(huì)發(fā)生較為明顯的變化。
　　腸道組織中，優(yōu)勢(shì)菌如鹽單胞菌、Candidatus Hepatincola、弧菌(Vibrios)、弓形桿菌(Arcobacter)等在蛻殼后(0天)比蛻殼前相對(duì)豐度均升高，而在蛻殼后0-15天呈降低趨勢(shì)。殼內(nèi)皮組織中，鹽單胞菌及涅斯捷連科氏菌(Nesterenkonia)蛻殼后相對(duì)豐度增加并在蛻殼后0-15天也為上升趨勢(shì)，而弧菌、黃質(zhì)菌(Flavobacterium)、黃桿菌

6、(Tenacibaculum)、假交替單胞菌(Pseudoalteromonas)及Leadbetterella等在蛻殼后一直呈下降趨勢(shì)。鰓組織中，Albimonas、Leadbetterella、黃桿菌、假交替單胞菌、弧菌等在蛻殼后的相對(duì)豐度均因舊鰓的蛻去而下降至較低水平。Albimonas、Leadbetterella的相對(duì)豐度在蛻殼0-6天上升至較高水平后下降，而假單胞菌、弧菌等在蛻殼后3天相對(duì)豐度便開(kāi)始下降，另外，黃桿菌的相對(duì)豐