擬穴青蟹雌雄性腺及其不同發(fā)育階段的差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、本研究以擬穴青蟹（Scylla paramamosain）為材料，比較研究了四種蛋白質(zhì)提取方法：尿素-硫脲提取法、TCA/丙酮沉淀法、Triton X-100-尿素提取法和Tris-尿素提取法的蛋白提取效果。結(jié)果表明，Tris-尿素提取法為擬穴青蟹性腺總蛋白最佳提取方法。該方法制備的樣品背景清晰，蛋白點(diǎn)最多,可以作為開展擬穴青蟹性腺蛋白質(zhì)組學(xué)研究的一種高效、簡便的方法。同時(shí)建立了適用于擬穴青蟹性腺總蛋白的雙向電泳體系,優(yōu)化了等電聚焦程序

2、、SDS-PAGE膠濃度以及與質(zhì)譜兼容的銀染方法。
　　對擬穴青蟹發(fā)育早期、發(fā)育期和成熟期的卵巢總蛋白分別進(jìn)行雙向電泳，運(yùn)用Image Master 2D Platinum6.0圖像分析軟件共篩選出69個(gè)差異蛋白點(diǎn)，選取其中15個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF/TOF MS和生物信息學(xué)分析，鑒定出11個(gè)蛋白點(diǎn)，屬于5種蛋白，分別為卵黃蛋白原，泛素C末端水解酶L3，延伸因子-1a，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和cryptocyanin。這些

3、蛋白在擬穴青蟹卵巢發(fā)育過程中主要起到營養(yǎng)物質(zhì)積累、蛋白質(zhì)的合成和分解、細(xì)胞免疫等功能。
　　對擬穴青蟹精母細(xì)胞期、精子細(xì)胞期和精子期的精巢總蛋白分別進(jìn)行雙向電泳，運(yùn)用ImageMaster2D Platinum6.0圖像分析軟件共篩選出49個(gè)差異蛋白點(diǎn)，選取其中15個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF/TOF MS和生物信息學(xué)分析，鑒定出12個(gè)蛋白點(diǎn)，屬于9種蛋白，即醛脫氫酶1L2、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、精氨酸激酶、蛋白酶體a亞基

4、、a微管蛋白、cryptocyanin、失效軸突連接蛋白和角蛋白。這些蛋白在擬穴青蟹精巢發(fā)育過程中主要起到能量代謝、蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞骨架和細(xì)胞免疫防御等功能。
　　對擬穴青蟹發(fā)育期卵巢和精子細(xì)胞期精巢總蛋白分別進(jìn)行雙向電泳，運(yùn)用Image Master 2D Platinum6.0圖像分析軟件共篩選出71個(gè)差異蛋白點(diǎn)，選取其中15個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF/TOF MS和生物信息學(xué)分析，鑒定出14個(gè)蛋白點(diǎn)，屬于7種蛋白，分