大鼠骨髓源性神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及其AFM鑒定的研究.pdf

1、目的：掌握BMSCs-D-NSCs的培養(yǎng)方法，探討神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(neuralcelladhsionmoleculate,NCAM)抗體的表達(dá)規(guī)律，并用原子力顯微鏡(atomicforcemicroscopy，AFM)對NCAM受體進(jìn)行三維定位測定，以期建立新的生物單分子免疫化學(xué)三維定位，定性，定量檢測方法，確立納米級BMSCs-D-NSCs鑒定新方法。 方法：以SD大鼠為研究對象，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定細(xì)胞，獲取純化的BM

2、SCs-D-NSCs。流式細(xì)胞儀檢測NCAM及Nestin表達(dá)規(guī)律，并用AFM檢測培養(yǎng)不同階段BMSCs-D-NSCs納米級特征，進(jìn)而與免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合對NCAM受體三維結(jié)構(gòu)定位分析，探討新的細(xì)胞鑒定方法的可行性。 結(jié)果：①BMSCs在專用神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基及bFGF、BDNF、RA的誘導(dǎo)下，可獲得較純化的BMSCs-D-NSCs，經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測巢蛋白(Nestin)呈陽性表達(dá)，繼續(xù)培養(yǎng)獲得的神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞可以

3、分別表達(dá)NSE和GFAP。②免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定BMSCs-D-NSCs表達(dá)NCAM及Nestin，流式細(xì)胞儀檢測NCAM及Nestin在6d有表達(dá)，前者在第20d達(dá)到峰值40.1﹪；后者在第12d達(dá)到峰值21.1﹪。③AFM檢測BMSCs-D-NSCs可知：平均表面粗糙度(Ra)為12.2±1.5nm，均方根表面粗糙度(Rrms)為13.2±1.4nm，直徑為14.3±1.3um。 結(jié)論：BMSCs在細(xì)胞因子bFGF,BDNF及R