人胚腦神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定及bFGF、EGF對腦缺血大鼠自體神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:探討人胚腦神經(jīng)干細(xì)胞的體外生長特性、分化情況和培養(yǎng)條件,為相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供條件.材料與方法:利用神經(jīng)干細(xì)胞的條件培養(yǎng)基,對從9周和1 2周胚齡的自然流產(chǎn)胎兒分離的前腦、后腦進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng),比較其生長特性,并分別觀察在無生長因子的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及含有胎牛血清的培養(yǎng)基中神經(jīng)干細(xì)胞的分化情況.以免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白(Nes t in)和分化后神經(jīng)細(xì)胞抗原的表達(dá).結(jié)論:從人胚腦組織的前、后腦中分離出神經(jīng)干細(xì)胞;較小

2、胚齡的腦組織原代培養(yǎng)時細(xì)胞克隆的形成比例較高;后腦組織分離的神經(jīng)干細(xì)胞比前腦組織來源的更容易分化.第二部分bFGF、EGF對腦缺血大鼠自體神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響;目的:通過建立大鼠短暫性局灶性腦缺血模型,觀察中風(fēng)大鼠皮下分別給予細(xì)胞因子bFGF、EGF以及bFGF和EGF聯(lián)合使用后對側(cè)腦室室管膜下區(qū)(SVZ)和海馬齒狀回(DG)神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況的影響.材料和方法:通過大腦中動脈阻塞(MCAO)法建立Sprague-Dawley(SD)大

3、鼠的短暫性局灶性腦缺血模型,在腦缺血后的前三天分別皮下注射bFGF、EGF以及bFGF+EGF,以后每隔三天注射一次生長因子.以5-溴脫氧嘧啶尿苷(Brdu)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞,用免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠腦缺血后第7、14、21天側(cè)腦室室管膜下區(qū)和海馬齒狀回Brdu陽性細(xì)胞的表達(dá)情況,統(tǒng)計(jì)Brdu陽性細(xì)胞數(shù),比較bFGF、EGF以及bFGF和EGF聯(lián)合使用對MCAO大鼠側(cè)腦室室管膜下區(qū)和海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況的影響.結(jié)論:腦缺血大鼠皮