腦缺血損傷后自體神經(jīng)干細胞增殖及分化的實驗研究.pdf

1、目的:研究成年大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后梗死周邊皮質(zhì)部位不同時間神經(jīng)干細胞(NSC)增殖、分化的變化規(guī)律。 方法:雄性Wistar大鼠共61只分為假手術(shù)組(5只)、腦缺血后12h組(8只)、腦缺血后24h組(8只)、腦缺血后72h組(8只)、腦缺血后1w組(8只)、腦缺血后2w組(8只)、腦缺血后3w組(8只)、腦缺血后4w組(8只)。采用線栓法制作腦缺血模型。大鼠于不同時間處死，處死前均注射5-溴脫氧尿苷嘧啶(BrdU)。以

2、神經(jīng)上皮干細胞蛋白(Nestin)檢測神經(jīng)干細胞的存在，以5-溴脫氧尿苷嘧啶(BrdU)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)分別作為增殖、分化的標志，采用免疫組化(SABC法)及免疫熒光技術(shù)動態(tài)檢測腦缺血損傷后不同時間點以梗死灶為中心的梗死周邊皮質(zhì)的BrdU、Nestin、BrdU+/NSE+、BrdU+/GFAP+陽性細胞的表達變化。 結(jié)果:1.TTC染色腦組織梗死灶染成白色，正常組織染成粉紅色，兩者

3、界限較明顯。壞死區(qū)位于額頂顳葉及內(nèi)囊，梗死面積為冠狀切面的(27.74±6.35)﹪，均達99﹪可信區(qū)限內(nèi)，高度一致。該模型缺血區(qū)域穩(wěn)定可靠；2.HE染色假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)正常，各缺血組腦組織結(jié)構(gòu)疏松、紊亂，神經(jīng)細胞水腫、變性、壞死，僅在4w組見有小膠質(zhì)細胞增生；3.BrdU陽性細胞數(shù)的變化假手術(shù)組腦組織皮質(zhì)可見少量BrdU陽性細胞，而且排列疏松。缺血再灌注組梗死周邊皮質(zhì)BrdU陽性細胞在缺血12h即有少量增加(p＞0.05)，24h明

4、顯增加，1w達高峰，2w開始下降，但仍然高于正常水平(p＜0.05)，4w接近正常水平；4.Nestin陽性細胞數(shù)的變化假手術(shù)組腦組織皮質(zhì)偶見Nestin陽性細胞，缺血再灌注組梗死周邊皮質(zhì)Nestin陽性細胞在24h開始增加，72h明顯增加(p＜0.05)，1w達高峰，2w開始下降，4w接近正常水平；5.BrdU+/NSE+、BrdU+/GFAP細胞數(shù)的變化梗死灶周邊皮質(zhì)部位BrdU+/NSE+細胞數(shù)在2w開始增加(p＜0.05)，4w

5、達高峰；BrdU+/GFAP+細胞數(shù)在腦缺血前后無明顯變化。 結(jié)論:1.假手術(shù)組腦組織皮質(zhì)中僅存在很少的神經(jīng)干細胞，腦缺血再灌注損傷后BrdU陽性細胞24h明顯增加及24h出現(xiàn)Nestin陽性細胞，且均在缺血損傷后1w達高峰，說明腦缺血再灌注損傷可激發(fā)成年大鼠自體神經(jīng)干細胞原位增殖，自體神經(jīng)干細胞對腦缺血損傷有一定的反應能力；2.腦缺血再灌注損傷后增殖的神經(jīng)干細胞大多數(shù)分化為神經(jīng)元，極少數(shù)分化為膠質(zhì)細胞，說明腦缺血再灌注損傷后機