炎癥反應(yīng)及其調(diào)控在腦動脈瘤發(fā)病中的作用和意義.pdf

1、目的：1．觀察人腦動脈瘤組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變；2．檢測單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、細胞間粘附分子．1(ICAM-1)及核轉(zhuǎn)錄因子-kappa B(NF-κ B)在人腦動脈瘤中的表達，探討腦動脈瘤的發(fā)病機制；3．研究MCP-1、ICAM-1和NF-κ B在血管內(nèi)皮細胞中表達及調(diào)控機制；4．觀察抗炎治療對實驗性兔頸總動脈瘤的療效。 方法：1．對20例人腦動脈瘤、6例人腹主動脈瘤和6例正常人腦動脈標(biāo)本進行光鏡及電鏡觀察；

2、2．免疫組化檢測動脈瘤壁組織中CD68(巨噬細胞分子標(biāo)記)、ICAM-1和NF-κ B的表達情況；熒光定量RT-PCR檢測動脈瘤壁組織中MCP-1mRNA表達情況；3．通過細胞培養(yǎng)觀察IL-1 β及地塞米松(Dex)對NF-κ B、MCP-1和ICAM-1在人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)中表達的影響，研究NF-κ B、MCP-1和ICAM-1表達的調(diào)控機制；4．彈力蛋白酶(elastase,EA)動脈外膜直接滴注法制作兔頸總動脈瘤動

3、物模型，觀察地塞米松對實驗性兔頸總動脈瘤的療效。 結(jié)果：1．人腦動脈瘤光鏡下管壁變薄向外膨出，內(nèi)皮細胞空泡變性、壞死脫落，部分內(nèi)皮細胞剝離并突入管腔成游離狀，可見血栓形成和機化；內(nèi)彈力板變薄、消失或中斷；平滑肌細胞數(shù)明顯減少，部分動脈瘤壁呈均質(zhì)狀玻璃樣變，中膜和外膜可見大量炎性細胞浸潤；整個動脈壁厚薄不均，局部區(qū)域顯著變薄、擴張。電鏡下可見瘤壁有動脈硬化，瘤壁全層可見炎細胞浸潤，以外膜多見；浸潤的細胞主要為巨噬細胞和淋巴細胞，

4、少數(shù)為中性粒細胞；可見內(nèi)彈力板斷裂和膠原纖維溶解；2.CD68陽性細胞在腦動脈瘤組織內(nèi)為10.05±1.79／高倍視野，在腹主動脈瘤組織內(nèi)為11.33±1.75／高倍視野，正常腦動脈壁內(nèi)未見CD68陽性表達；ICAM-1在腦動脈瘤組織中的平均光密度(MD)值為0.285±0.033，在正常腦動脈中為0.096±0.021，腦動脈瘤組織中ICAM-1表達高于正常腦動脈(P<0.01)；NF-κ B在腦動脈瘤組織內(nèi)主要在血管內(nèi)皮細胞、平滑肌

5、細胞和炎性細胞中表達，其平均光密度(MDl值為0.312±0.037，而在正常腦動脈壁內(nèi)為0.083±0.022，腦動脈瘤組織中NF-κ B表達高于正常腦動脈(P<0.01)；MCP-1 mRNA在20例腦動脈瘤和6例腹主動脈瘤患者血管壁組織內(nèi)△Ct值分別為2.30±1.32和3.00±1.27，而在6例正常腦動脈中為5.5±1.69，動脈瘤組織MCP-1 mRNA表達高于正常腦動脈(P<0.01)。運用Livak方法計算：MCP-1在

6、腦動脈瘤和腹主動脈瘤中的基因表達水平分別是正常腦動脈中的9.38和5.77倍；3．在沒有外界干預(yù)的情況下，HUVEC幾乎不表達NF-κ B，但可低水平表達ICAM-1。在培養(yǎng)的HUVEC培養(yǎng)液中加入IL-1 β后4小時，NF-κ B和ICAM-1表達明顯升高，24小時達高峰并維持在較高水平。用地塞米松處理一小時后再加入IL-1 β刺激則NF-κ B和ICAM-1表達明顯抑制，且兩者表達呈正相關(guān)(r=0.872，P<0.01)；MCP-1

7、在IL-1 β組和IL-1 β+Dex組中的基因表達水平在實驗前沒有明顯差別，但實驗后8小時IL-1 β組MCP-1表達升高并高于IL-1 β+Dex組(P<0.01)，24小時達高峰，32小時仍然有顯著差異，其表達水平與NF-κ B表達呈正相關(guān)(r=0.881，P<0.01)；4．術(shù)后7天治療組和對照組兔頸總動脈瘤最大直徑?jīng)]有明顯差異(P>0.05)，但術(shù)后15天治療組動脈瘤最大直徑明顯小于對照組(P<0.01)。術(shù)后7、15天治療組

8、動脈瘤壁炎癥和彈力纖維破壞程度較對照組為輕。對照組術(shù)后7天內(nèi)可見管壁全層有大量炎細胞浸潤，以外膜和血栓處為重，瘤腔內(nèi)可有血栓形成。被破壞的動脈壁內(nèi)彈力板部分?jǐn)嗔选⑷芙馄茐?，彈力纖維拉直，中層平滑肌變薄，肌纖維拉直。術(shù)后15天炎癥更加明顯，管壁厚薄不均，彈力纖維較術(shù)后7天破壞更加嚴(yán)重。 結(jié)論：1．腦動脈瘤病理學(xué)改變主要是動脈壁炎癥反應(yīng)和基質(zhì)結(jié)構(gòu)的嚴(yán)重破壞，包括動脈壁彈力纖維破壞、膠原纖維溶解和平滑肌細胞數(shù)的減少和消失。參加炎癥反

9、應(yīng)的細胞主要是巨噬細胞和淋巴細胞，推測動脈壁結(jié)構(gòu)的破壞是炎癥反應(yīng)的結(jié)果。動脈瘤組織中CD68表達顯著升高，巨噬細胞可通過分泌蛋白酶(包括MMP)的途徑破壞動脈壁的基質(zhì)結(jié)構(gòu)如彈性蛋白和膠原蛋白，從而引起動脈瘤的發(fā)生、發(fā)展和破裂。動脈瘤中NF-kB和ICAM-1的高表達可通過炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)動脈瘤的形成、發(fā)展和破裂。RT-PCR方法研究顯示：動脈瘤組織中MCP-1 mRNA高表達和巨噬細胞浸潤程度(CD68陽性表達)呈正相關(guān)，表明MCP-1是巨

10、噬細胞浸潤的主要調(diào)控因子；2．HUVEC受IL-1 β活化后高表達NF-kB、ICAM-1和MCP-1，因此血管內(nèi)皮細胞在炎癥反應(yīng)過程中通過產(chǎn)生細胞因子而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。地塞米松可抑制刪VEC表達NF-k B、ICAM-1和MCP-1。在HUVEC中，NF-kB上調(diào)ICAM-1和MCP-1的表達，從而調(diào)控血管內(nèi)皮細胞參與炎癥反應(yīng)的過程；3．動脈壁彈力纖維破壞可導(dǎo)致腦動脈瘤形成；炎癥反應(yīng)可促進動脈瘤的形成過程；抗炎治療(如地塞米松治療)對實