AT1R在腎血管性高血壓大鼠腸系膜動(dòng)脈eNOS磷酸化調(diào)控中的作用.pdf

1、目的：以腎血管性高血壓大鼠為研究對(duì)象，探討在高血壓的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，AT1R在腸系膜動(dòng)脈內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)磷酸化調(diào)控中的作用。
　　方法：采用成年雄性SD大鼠，雙腎單夾法狹窄右側(cè)腎動(dòng)脈復(fù)制腎血管性高血壓大鼠(two-kidney one-clip renovascular hypertensive rats,2K1C RHR)模型，設(shè)立Sham-4周(

2、w)組(n=8)和Sham-8w組(n=18)、2K1C-4w組(n=8)和2K1C-8w組(n=18)、AT1R阻滯劑(AngⅡtype1 receptor blocker，ARB)治療組(n=18)。采用無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)試儀檢測(cè)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓。至各組觀測(cè)時(shí)間結(jié)束后處死大鼠，留取腸系膜動(dòng)脈。采用Western Blotting方法檢測(cè)各組大鼠腸系膜動(dòng)脈組織eNOS總蛋白的表達(dá)、eNOS Ser1179、eNOS Ser635、eNOS T

3、hr497位點(diǎn)的磷酸化水平變化，Akt總蛋白的表達(dá)、Akt Thr308、Akt Ser473位點(diǎn)的磷酸化水平變化以及蛋白磷酸酶(protein phosphatase，PP)PP1、PP2A蛋白表達(dá)的變化。采用化學(xué)比色法檢測(cè)腸系膜動(dòng)脈組織一氧化氮(nitric oxide，NO)的含量。
　　結(jié)果：①與Sham組比較，2K1C術(shù)后2w血壓開(kāi)始明顯升高（P＜0.05）；ARB治療組在給予AT1R阻滯劑坎地沙坦酯片灌胃4w后血壓明顯

4、降低（P＜0.05）；②與 Sham-4w組比較，2K1C-4w組Akt Ser473位點(diǎn)磷酸化水平明顯降低（P＜0.05），eNOS總蛋白、eNOS Ser1179、eNOS Ser635、eNOS Thr497位點(diǎn)磷酸化水平、Akt總蛋白、Thr308位點(diǎn)磷酸化水平及 PP1、PP2A蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；③與 Sham-8w組比較，2K1C-8w組的eNOS Ser1179、eNOS Ser635、Akt Ser473位點(diǎn)

5、磷酸化水平明顯降低（P＜0.05），eNOS總蛋白、eNOS Thr497位點(diǎn)磷酸化水平、Akt總蛋白、Thr308位點(diǎn)磷酸化水平及 PP1、PP2A蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；④與2K1C-8w組比較，ARB治療組的eNOS Ser1179、eNOS Ser635、Akt Ser473位點(diǎn)磷酸化水平明顯增高（P＜0.05），eNOS總蛋白、eNOS Thr497位點(diǎn)磷酸化水平、Akt總蛋白、Thr308位點(diǎn)磷酸化水平及 PP1、PP

6、2A蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；⑤與 Sham-8w組比較，2K1C-8w組NO含量顯著降低（P＜0.05），與2K1C-8w組比較，ARB治療組NO含量明顯增高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：2K1C大鼠術(shù)后2w時(shí)血壓明顯升高，2K1C-4w組腸系膜動(dòng)脈Akt Ser473位點(diǎn)磷酸化水平降低，2K1C-8w組腸系膜動(dòng)脈Akt Ser473、eNOS Ser1179、eNOS Ser635位點(diǎn)磷酸化水平降低，NO產(chǎn)量明顯降低，這可

7、能是在血壓升高過(guò)程中造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷所致。eNOS Ser1179位點(diǎn)磷酸化水平降低可能與Akt Ser473位點(diǎn)磷酸化水平下調(diào)有關(guān)，與PP1、PP2A蛋白表達(dá)無(wú)關(guān)。應(yīng)用ARB治療后可以明顯提高Akt Ser473、eNOS Ser1179、eNOS Ser635位點(diǎn)的磷酸化水平，提示血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)和內(nèi)皮細(xì)胞膜上的AT1R結(jié)合后，抑制了 PI3K/Akt信號(hào)通路，Akt Ser473位點(diǎn)磷酸化水平降低，進(jìn)一步使 eNOS