IGF1R酪氨酸激酶細(xì)胞模型構(gòu)建及藥物篩選的應(yīng)用.pdf

1、胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(insulin-like growth factor1 receptor，IGF1R)是酪氨酸蛋白激酶家族的成員，在各種類(lèi)型細(xì)胞上均有表達(dá)。IGF1R具有潛在的有絲分裂原作用，可促進(jìn)細(xì)胞的增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受凋亡等生物功能，其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，因此IGF1R被認(rèn)為是非常具有潛力的抗腫瘤藥物的靶點(diǎn)。
　　 本論文構(gòu)建酪氨酸激酶IGF1R組成型高表達(dá)的細(xì)胞模型，并以該細(xì)胞

2、模型對(duì)天然產(chǎn)物化合物庫(kù)進(jìn)行高通量藥物篩選，篩選出對(duì)酪氨酸激酶IGF1R具有特異性抑制作用的組分。該結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證該IGF1R酪氨酸激酶細(xì)胞模型的穩(wěn)定性、可靠性及其于藥物篩選的應(yīng)用。
　　 1.IGF1R酪氨酸激酶細(xì)胞模型構(gòu)建
　　 以實(shí)驗(yàn)室己構(gòu)建的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Tel為基礎(chǔ)，將IGF1R基因與之連接構(gòu)建重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入IL3依賴性的小鼠原B細(xì)胞(BaF3細(xì)胞)并在G418及IL3非依

3、賴性的條件下篩選出能夠組成型高表達(dá)IGF1R激酶活性的細(xì)胞株BaF3/Tel-IGF1R。通過(guò)分別從分子水平，蛋白水平及功能水平的鑒定，說(shuō)明篩選所得到BaF3/Tel-IGF1R細(xì)胞株能夠正確的表達(dá)配體非依賴性的具有組成型活性的酪氨酸激酶IGF1R，為后續(xù)藥物篩選的應(yīng)用打下良好的基礎(chǔ)。
　　 2.酪氨酸激酶IGF1R細(xì)胞模型的藥物篩選應(yīng)用
　　 以構(gòu)建的BaF3/Tel-IGF1R細(xì)胞株為高通量篩選的細(xì)胞模型，從天然產(chǎn)物