激活GABAc受體對(duì)大鼠癲癇發(fā)作及腦內(nèi)Glu、EAAT1-mRNA及EAAT1-P表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 研究癲癇發(fā)作期、終止發(fā)作期及終止發(fā)作后7天內(nèi)大鼠腦內(nèi)谷氨酸(Glu)、谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體mRNA(EAAT1-mRNA)及谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(E0AAT1-P)表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。分析癲癇發(fā)作全過程中激活GABAc受體后對(duì)癲癇發(fā)作、癇性放電和大鼠腦內(nèi)海馬區(qū)Glu、EAAT1-mRNA表達(dá)及EAAT1-P含量變化的影響，探討GABAc受體在癲癇發(fā)作過程中的作用及作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 采用健康成年Sp

2、rague-Dawley(SD)大鼠運(yùn)動(dòng)皮層定位注射青霉素(Penicillin，PNC)誘導(dǎo)癲癇發(fā)作模型，應(yīng)用RM6240C型多道生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)同步記錄癲癇大鼠皮層腦電圖(EcoG)，以GABAA受體阻斷劑荷包牡丹堿(Bicuculline，BIC)、GABAB受體阻斷劑高牛黃酸(Homotaurine,3APS)和GABAc受體激活劑蠅蕈醇(Muscimol，MUS)為工具藥，癲癇發(fā)作持續(xù)時(shí)間和Racine癇性行為學(xué)分級(jí)作為效

3、應(yīng)指標(biāo)。分別于癲癇發(fā)作高峰，在阻斷GABAA，B受體條件下腹腔注射MUS，分析激活GABAc受體后對(duì)癲癇活動(dòng)及EcoG癇樣波潛伏期、發(fā)放頻率、最高振幅的影響。采用免疫組化法測(cè)定癲癇發(fā)作高峰期及發(fā)作終止后即刻、發(fā)作后的1、2、3和7天海馬區(qū)Glu和EAAT1-P含量；采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(syble-green Rt-PCR)技術(shù)在相同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定EAAT1-mRNA表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1)大鼠運(yùn)動(dòng)皮層

4、定位注射PNC后，成功誘導(dǎo)癲癇發(fā)作，均出現(xiàn)癲癇樣腦電和癇性行為，表現(xiàn)為Ⅰ～Ⅲ級(jí)發(fā)作。腹腔注射GABAA,B受體阻斷劑后，大鼠癲癇發(fā)作程度顯著增強(qiáng)，發(fā)作持續(xù)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，癇樣放電頻率和棘波振幅明顯加大，與PNC組比較，差異均有顯著性（P皆<0.05）。應(yīng)用MUS后，觀察到大鼠癲癇發(fā)作程度明顯減輕，發(fā)作持續(xù)時(shí)間明顯縮短，相同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)癇樣波發(fā)放頻率明顯減少，癇樣波最高振幅也得以降低，分別與PNC組及GABAA,B受體阻斷劑組（GAB組）比較，

5、差異均有顯著性（P皆<0.05）。
　　 (2)癲癇發(fā)作高峰期，PNC組大鼠海馬區(qū)Glu含量明顯升高，與正常組比較差異有顯著性(P<0.05)；與PNC組比較，GAB組Glu含量進(jìn)一步升高(P<0.05)，而給予MUS后Glu含量低于GAB組(P<0.05)；癲癇發(fā)作終止時(shí)，PNC組、GAB組和MUS組Glu含量與各組所對(duì)應(yīng)的發(fā)作高峰期相比均顯示降低，差異均有顯著性（P皆<0.05）。終止發(fā)作后的1～7天內(nèi)仍呈持續(xù)下降趨勢(shì)，且無(wú)

6、反彈。其中MUS組下降更為明顯和迅速，癲癇發(fā)作終止時(shí)及終止后的1～3天內(nèi)Glu含量均低于PNC組和GAB組，差異均有顯著性(P皆<0.05)。MUS組在第2天時(shí)已經(jīng)接近正常水平(P>0.05)，PNC組第3天基本恢復(fù)正常水平(P>0.05)；而GAB組至第7天回復(fù)至正常水平(P<0.05)。
　　 (3)癲癇發(fā)作高峰期，PNC組大鼠海馬區(qū)EAAT1-P表達(dá)量明顯降低，同正常組相比有顯著性差異(P<0.05)；給予GABAA,B受

7、體阻斷劑后，在GAB組和MUS組內(nèi)EAAT1-P表達(dá)量與PNC組比較進(jìn)一步降低(P<0.05)；癲癇發(fā)作終止時(shí)，PNC組、GAB組和MUS組EAAT1-P表達(dá)量與各組的發(fā)作高峰期相比，明顯升高，差異均有顯著性（P皆<0.05）。終止發(fā)作后的1～7天內(nèi)各組的EAAT1-P表達(dá)量呈持續(xù)升高趨勢(shì)。尤其在癲癇發(fā)作終止時(shí)及終止后的1～3天內(nèi)，以MUS組EAAT1-P表達(dá)量升高幅度最為明顯和迅速，與PNC組和GAB組比較，差異均有顯著性（P皆<0.

8、05）。MUS組在終止時(shí)刻即接近至正常水平(P>0.05)，在2～7天內(nèi)，繼續(xù)增加并高出正常值，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PNC組d1時(shí)基本恢復(fù)正常水平(P>0.05)，在3～7天時(shí)，繼續(xù)升高并超過正常值，但無(wú)顯著性差異(P>0.05)。而GAB組至第7天仍低于正常水平，但差異無(wú)顯著性(P>0.05)。
　　 (4)癲癇發(fā)作高峰期，PNC組大鼠海馬區(qū)EAAT1-mRNA表達(dá)量較正常組明顯降低，且具有顯著性差異(P<0.05

9、)，給予GABAA,B受體阻斷劑后，在GAB組和MUS組內(nèi)EAAT1-mRNA表達(dá)量與PNC組比較進(jìn)一步降低(P<0.05);GAB組EAAT1-mRNA表達(dá)量與PNC組比較進(jìn)一步降低(P<0.05)；癲癇發(fā)作終止時(shí)，PNC組、GAB組和MUS組EAAT1-mRNA表達(dá)量與各組所對(duì)應(yīng)的發(fā)作高峰期時(shí)比較，均顯示升高，差異有顯著性(P<0.05)。終止發(fā)作后的1～7天內(nèi)各組均呈持續(xù)回升趨勢(shì)。其中以MUS組的升高趨勢(shì)最為明顯和迅速，癲癇發(fā)作終

10、止時(shí)及終止后的1～3天內(nèi)EAAT1-mRNA表達(dá)量均高于GAB組，差異均有顯著性(P<0.05)。MUS組在第2天時(shí)已經(jīng)恢復(fù)至正常水平(P>0.05)，PNC組第3天接近正常水平(P>0.05)，而GAB組于第7天恢復(fù)至正常水平(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)大鼠運(yùn)動(dòng)皮層定位注射PNC能成功誘導(dǎo)癲癇發(fā)作，當(dāng)阻斷GABAA,B受體后，導(dǎo)致癲癇發(fā)作程度增強(qiáng)，發(fā)作時(shí)間延長(zhǎng)，激活GABAc受體后，能終止PNC與GA

11、BAA,B受體阻斷劑協(xié)同誘發(fā)的癇性放電和癲癇發(fā)作。
　　 (2)PNC誘導(dǎo)癲癇發(fā)作過程中，海馬內(nèi)Glu含量顯著升高，EAAT1-P含量以及EAAT1-mRNA表達(dá)明顯降低；癲癇自行終止發(fā)作過程中，Glu含量降低而EAAT1-P含量、EAAT1-mRNA表達(dá)明顯回升，使終止發(fā)作；癲癇自行終止發(fā)作后7天內(nèi)，Glu持續(xù)降低而EAAT1-mRNA表達(dá)增加，EAAT1-P含量持續(xù)升高，未見復(fù)發(fā)；
　　 (3)激活GABAc受體后，