半夏生物總堿對癲癇大鼠EcoG、CEP及腦內(nèi)GABA受體和Glu受體的影響.pdf

1、本文研究目的：建立大鼠大腦皮層誘發(fā)電位(CEP)和癇性放電模型，證明CEP的變化可作為判定動物致癇、致癇程度以及在抗癲癇藥物研究中判定藥效的新型電生理指標后，觀察半夏生物總堿(PTA)對癲癇大鼠大腦皮層腦電圖(EcoG)、CEP的影響，分析PTA對γ-氨基丁酸(GABA)受體、谷氨酸(Glu)受體以及腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA表達的影響，探討PTA抗癲癇作用的受體機制。 研究方法： (1)采用電刺激坐骨神經(jīng)和青霉素

2、(PNC)、谷氨酸分別協(xié)同誘發(fā)大鼠癲癇模型，用RM6240C型多道生物信號采集處理系統(tǒng)同步記錄癲癇大鼠EcoG和CEP，分析舌下靜脈注射(siv)PTA 400mg/kg對EcoG癇樣波潛伏期、頻率、振幅及CEP振幅的影響。 (2)采用Pearson相關分析法，對PNC模型對照組、Glu模型對照組、PTA+PNC及PTA+Glu組EcoG癇樣波頻率和CEP振幅分別進行相關分析。 (3)采用大鼠CEP模型，以GABA和2-

3、氨基-5-磷酰基戊酸酯(AP<,5>)為陽性對照，Glu和PNC為工具藥，CEP振幅為觀察指標，分別siv不同劑量GABA、AP<,5>、PTA，通過累加給藥后，繪制三藥的量效曲線，觀察Glu和PNC對各藥量效曲線的影響，計算各藥的IC<,50>，比較三藥對CEP振幅的抑制強度。通過量效曲線分析，判定PTA對GABA受體和Glu受體的作用。 (4)采用青霉素慢性點燃大鼠模型及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術(shù)，觀察灌胃兩種劑

4、量PTA對癇性發(fā)作潛伏期、發(fā)作程度及腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA表達的影響。 研究結(jié)果： (1)電刺激大鼠坐骨神經(jīng)后，可在大腦皮層對側(cè)相應感覺區(qū)汜錄到典型的CEP，分別側(cè)腦室注射PNC、Glu后，EcoG均出現(xiàn)明顯的癇樣波，當EcoG癇樣波頻率高時，CEP振幅也相應增高。PTA可使電刺激坐骨神經(jīng)和PNC、Glu分別協(xié)同誘發(fā)癲癇大鼠的EcoG癇樣波潛伏期明顯延長、頻率和振幅顯著降低、CEP振幅亦明顯降低，與PNC模型對

5、照組、Glu模型對照組比較，均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。(2)相關分析結(jié)果：PNC組大鼠EcoG癇樣波頻率和CEP振幅變化的相關系數(shù)為r=0.947(P<0.01)，PTA+PNC組r=0.939(P<0.01)，Glu組r=0.930(P<0.01)，PTA+G1u組r=0.864(P<0.05)。(3)GABA、AP5、PTA均呈濃度依賴性抑制CEP振幅，加入GABA受體拮抗劑PNC后，可使GABA、PTA的量效曲線右移，但GA

6、BA的最大效能不變，而PTA的最大效能降低；加入Glu后，也使AP<,5>、PTA的量效曲線右移，但AP<,5>的最大效能不變，而PTA的最大效能降低。(4)青霉素慢性點燃大鼠腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA表達減少，與正常組有顯著性統(tǒng)計學差異(P<0.01)；兩種劑量PTA預防性干預可使癇性發(fā)作的潛伏期延長，與模型組相比均有顯著差異(P<0.01)，且發(fā)作程度減輕；還可使GABA<,A>受體mRNA表達明顯增加，與模型組相比均有統(tǒng)計學

7、差異(P<0.05，P<0.01)，與正常組無統(tǒng)計學差異。 研究結(jié)論： (1)通過對PNC、Glu誘發(fā)的EcoG癇樣波頻率和CEP振幅及受PTA作用影響后的EcoG癇樣波頻率和CEP振幅進行相關分析，它們均具有很好的相關性。因此表明，CEP振幅的變化不僅可作為判定動物是否致癇及反應致癇程度的電學指標，而且在抗癲癇藥物的動物實驗研究中亦可作為判定藥效的新指標。 (2)PTA可使側(cè)腦室注射PNC誘發(fā)癇樣放電的潛伏期明

8、顯延長，同時使PNC誘發(fā)的棘波發(fā)放頻率和振幅明顯降低，CEP振幅顯著降低，對陣發(fā)性去極化漂移(PDS)產(chǎn)生抑制作用，其機制可能與增強GABA系統(tǒng)抑制功能有關。 (3)PTA能明顯對抗側(cè)腦室注射Glu誘發(fā)的癇性發(fā)作，可使癇樣放電的潛伏期明顯延長、癇樣放電頻率和振幅明顯降低，同時顯著降低CEP振幅，這些作用均可作為PTA降低動物腦內(nèi)Glu興奮系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制和興奮功能平衡，限制癇性放電的發(fā)生與擴散的證據(jù)。 (4

9、)GABA、AP<,5>和PTA均呈濃度依賴性抑制CEP振幅；GABA與PNC對GABA受體產(chǎn)生競爭性拮抗；與GABA比較，PNC可使PTA的最大效能降低，表明PTA與PNC對GABA受體產(chǎn)生非競爭性拮抗；AP<,5>和Glu對Glu受體產(chǎn)生競爭性拮抗，而PTA和Glu對Glu受體呈非競爭性拮抗。三者對CEP振幅的抑制強度由大到小依次為AP<,5>>GABA>PTA。產(chǎn)生非競爭性拮抗可能與以下機制有關： ①PTA與PNC或Glu

10、作用于受體的不同部位，PNC或Glu與相應受體結(jié)合后，導致受體的構(gòu)象發(fā)生改變，阻礙了PTA與相應受體的結(jié)合，因而使其最大效能降低； ②PTA作用于受體信號傳導過程中的其他環(huán)節(jié)； ③PTA的抗癲癇作用與GABA、Glu受體沒有直接的關系，而是通過其他機制發(fā)揮其抗癇作用的。 (5)PTA可使癇性發(fā)作的潛伏期延長，發(fā)作程度降低，能明顯對抗青霉素慢性點燃大鼠引起的癲癇發(fā)作。其抗癲癇機制與增加腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA