鉤藤堿對(duì)缺血-缺氧大鼠海馬區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞EAAT2和NR2B mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察在缺血缺氧條件下，海馬區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2和NR2BmRNA的表達(dá)，和鉤藤堿干預(yù)后EAAT2和NR2BmRNA表達(dá)的變化，從而探討鉤藤堿對(duì)細(xì)胞缺血缺氧后EAAT2和NR2B基因表達(dá)的作用。
　　方法：
　　取新生SD大鼠(72h內(nèi))海馬組織進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)，取第4代膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞爬片后行GFAP熒光免疫鑒定，陽(yáng)性率達(dá)90％-95%以上細(xì)胞可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、缺

2、血缺氧組、鉤藤堿低劑量組（0.02mg/ml）、鉤藤堿高劑量組（0.2mg/ml）。通過(guò)使用含連二亞硫酸鈉的Earle’s平衡鹽溶液的化學(xué)方法制作體外細(xì)胞缺血缺氧模型，通過(guò)提取各組總RNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、細(xì)胞經(jīng)原代培養(yǎng)7-9天后細(xì)胞密度基本可達(dá)80%-90%,且以星形膠質(zhì)細(xì)胞為主。傳代的星形膠質(zhì)細(xì)胞有較強(qiáng)

3、的折光性，其形態(tài)不規(guī)則，胞體較大而扁平、胞漿豐富，胞核位于胞體一邊；2、缺血缺氧組及鉤藤堿組星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的表達(dá)較空白對(duì)照組明顯升高；3、鉤藤堿低劑量組較缺血缺氧組星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的表達(dá)下調(diào)不明顯，鉤藤堿高劑量組較缺血缺氧組、鉤藤堿低劑量組星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的