亞低溫對大鼠全腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)及超微結(jié)構(gòu)改變影響的研究.pdf

1、目的:研究亞低溫干預(yù)后大鼠全腦缺血再灌注后不同時間點，海馬CA1區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)的變化，電鏡下觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，了解它的死亡方式及亞低溫干預(yù)的影響。 方法:采用四血管阻斷法建立大鼠全腦缺血模型。雄性成年SD大鼠96只，隨機分為假手術(shù)組，常溫缺血組和亞低溫干預(yù)組，每組設(shè)缺血再灌注后6h、12h、24h、4d四個時間點，每一時間點各8只(n=8)。HE染色觀察海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變

2、，免疫組織化學(xué)方法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞胞漿膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)、TUNEL法及GFAP免疫組化雙標(biāo)染色觀察海馬CA1區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的死亡方式；另取缺血再灌注24h、4d時間點常溫缺血組和亞低溫干預(yù)組各2只大鼠投射電鏡下觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果: 1.HE染色結(jié)果：假手術(shù)組各個時間點海馬錐體細(xì)胞排列整齊，高倍鏡下細(xì)胞核大而圓，有1～2個核仁。常溫缺血組和亞低溫干預(yù)組于全腦缺血再灌注后6h，HE染色未見明

3、顯改變；再灌注12h后，CA1區(qū)錐體細(xì)胞高倍鏡下出現(xiàn)輕微改變，個別細(xì)胞有胞體縮??；再灌注24h后損傷開始加重，出現(xiàn)錐體細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞胞體縮小、胞核固縮深染；再灌注4d時損傷最嚴(yán)重，錐體細(xì)胞排列紊亂，核膜不清，核仁消失。而亞低溫干預(yù)組海馬存活的錐體細(xì)胞數(shù)較之常溫組24h、4d時間點均明顯增加。 2.TUNEL法及GFAP免疫組化雙標(biāo)染色：假手術(shù)組6h時間點未發(fā)現(xiàn)有TUNEL陽性的細(xì)胞，12h、24h及4d時間點發(fā)現(xiàn)有少許細(xì)胞核

4、染為紫藍(lán)色的陽性細(xì)胞。在海馬CA1區(qū)，常溫組于再灌注6h后出現(xiàn)TUNEL陽性細(xì)胞，24h后陽性細(xì)胞數(shù)最多，再灌注4d后陽性細(xì)胞數(shù)稍減少。而亞低溫干預(yù)組在6h及12h點僅有少量TUNEL陽性細(xì)胞，于24h點陽性細(xì)胞數(shù)增多，該三個時間點陽性細(xì)胞數(shù)均較常溫缺血組少。再灌注4d后陽性細(xì)胞數(shù)最多，且多于常溫缺血組。各個時間點未發(fā)現(xiàn)胞核及胞漿均為免疫反應(yīng)陽性的細(xì)胞，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞不是以凋亡的方式死亡。 3.GFAP免疫組化結(jié)果：常溫組于缺

5、血再灌注6h后胞漿出現(xiàn)免疫反應(yīng)增強，隨著再灌注時間的延長，GFAP表達(dá)逐漸增高，于4d時達(dá)到高峰；亞低溫組較假手術(shù)組比，于缺血再灌注6h時間點輕度免疫反應(yīng)增強，24h時間點出現(xiàn)免疫表達(dá)增強，但較常溫組比，GFAP的免疫表達(dá)降低，再灌注4d時其表達(dá)較常溫組降低。 4.電鏡結(jié)果：缺血再灌注24h后，電鏡下常溫缺血組可見大量反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)，形態(tài)上呈星狀，體積增大，胞膜輪廓不清，胞漿渾濁腫脹，空泡樣疏松化，線粒體嵴模糊、消失。亞

6、低溫干預(yù)組電鏡下星形膠質(zhì)細(xì)胞胞膜輪廓尚清，細(xì)胞有輕度水腫，周隔組織腫脹較輕。再灌注4d后，常溫缺血組可見星形膠質(zhì)細(xì)胞核染色質(zhì)溶解，線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等膜結(jié)構(gòu)大多腫脹破裂，水腫嚴(yán)重的細(xì)胞胞膜及核膜均有破裂現(xiàn)象，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞足以脹亡(oncosis)的方式死亡。亞低溫干預(yù)組細(xì)胞水腫，殘留較多形態(tài)相對正常的星形膠質(zhì)細(xì)胞，線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊泡少許腫脹和擴張，有時可見星形膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)低電子密度的空泡，脹亡樣死亡的星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目較常溫