四倍體苜蓿體細(xì)胞胚胎發(fā)生及抗寒基因CBF1轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文y7 6 6 6 8 S四倍體苜蓿體細(xì)胞胚胎發(fā)生及抗寒基因C B F l 轉(zhuǎn)化的研究學(xué)位論文答辯委員會作者：陳云鳳導(dǎo)師：黃學(xué)林教授號業(yè)： 植物學(xué)中山入學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣州5 1 ( ) 2 7 52 0 0 5 年3 月器髂，4 。稈L 乒 主委陳云風(fēng) 中山大學(xué)碳士學(xué)位論文 中文摘要 2 0 0 5 年3通過以上的研究，建立了一個(gè)較穩(wěn)定的間接體胚發(fā)生體系。合適的外植體是第二片和第三片復(fù)葉的葉柄。其愈傷組織誘導(dǎo)和繼代培

2、養(yǎng)基是B s h 基本培養(yǎng)基，附加4 ．7t t m o l ／L 2 ，4 ．D ，0 ．9 3 6 l a m o l ／L K T , 3 ％蔗糖，0 ．7 ％瓊脂粉，p H5 ．5 ；體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基是S H 液體培養(yǎng)基，附加4 ．7 u m o l ／L 2 ，4 - D ，O ．5 4 um o l ／L N A A ，3 ％蔗糖，p H 5 ．5 ；體胚發(fā)育培養(yǎng)基是S H 液體培養(yǎng)基，附加3 ．4 5 9 ／L L - 脯氨

3、酸，1 ．6 5 9 ／L 硫酸氨，3 ％麥芽糖，p H 5 , 8 。所有培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件是2 5 。C ，1 6 ／8 h 光照。在體胚誘導(dǎo)和發(fā)育期，懸浮培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速是1 0 0 r p m 。以四倍體菖蓿的體胚切塊為轉(zhuǎn)化受體，以含有C a M V 3 5 S 啟動(dòng)子調(diào)控下的C B 幾基因的質(zhì)粒雙元載體p B P C B F l 為表達(dá)載體并導(dǎo)入L B A 4 4 0 4 ，初步研究了C B F l 基因的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)共轉(zhuǎn)