IL-6在雞葡萄球菌性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、8W健康艾維茵肉雞120羽隨機(jī)分成空白對(duì)照組、藥物對(duì)照組、感染對(duì)照組和藥物治療組，每組30羽。感染對(duì)照組和藥物治療組經(jīng)右跗關(guān)節(jié)腔接種0.35mL(7.1×109CFU/mL)雞源致病性金黃色葡萄球菌懸液復(fù)制雞葡萄球菌性關(guān)節(jié)炎的病理模型，空白對(duì)照組和藥物對(duì)照組同種途徑接種0.35mL滅菌生理鹽水，接種后3d藥物治療組和藥物對(duì)照組開(kāi)始用5mg/kg左旋氧氟沙星連續(xù)灌服4d，觀察各組臨床癥狀和病理變化，并于接種后0、1、4、7、14、21、2

2、8、35d，各組取8羽雞由貴要靜脈采血3mL，分離血清，-40℃保存，應(yīng)用建立的雞血清白細(xì)胞介素-6(chickeninterleukin-6，chIL-6)活性MTT檢測(cè)方法和ELISA方法研究血清中chIL-6活性與濃度的動(dòng)態(tài)變化。 采用IL-6依賴(lài)細(xì)胞株建立雞血清chIL-6活性MTT檢測(cè)方法。結(jié)果顯示：該方法采用B9細(xì)胞株，每孔培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)為1.0×104個(gè)，培養(yǎng)時(shí)間為72h，OD值與細(xì)胞數(shù)顯示有良好的線性關(guān)系；MTT的使

3、用濃度為5mg/mL，最適劑量為每孔20μL，MTT最佳保留時(shí)間為4h；本方法最低檢測(cè)限為0.1U/mL，具有較好的敏感性、穩(wěn)定性和重復(fù)性。 人工接種葡萄球菌后，感染對(duì)照組雞右跗關(guān)節(jié)在接種后7d明顯腫大，左跗關(guān)節(jié)在接種后14d左右明顯腫大，并出現(xiàn)雞只死亡，試驗(yàn)結(jié)束共死亡7羽；治療組雞治療一周后關(guān)節(jié)腫脹逐漸減輕，試驗(yàn)期間僅死亡1羽。接種后35d，剖檢可見(jiàn)感染對(duì)照組雞關(guān)節(jié)腫脹，內(nèi)含干酪樣滲出物，肌腱、關(guān)節(jié)軟骨和韌帶壞死；心肌出血，肝

4、臟出血、壞死。治療組剖檢后除心、肝有散在的出血點(diǎn)外，其它臟器肉眼未見(jiàn)異常變化?？瞻讓?duì)照組和藥物對(duì)照組試驗(yàn)期間未見(jiàn)異常。 組織病理學(xué)檢查表明，接種后35d，感染對(duì)照組雞免疫組織器官的形態(tài)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，淋巴小結(jié)呈現(xiàn)增生性變化，胸腺、盲腸扁桃體出血，法氏囊水腫、出血，淋巴濾泡內(nèi)有囊腫形成。治療組雞免疫組織器官僅見(jiàn)法氏囊漿膜下水腫，少數(shù)淋巴濾泡內(nèi)有囊腫形成，淋巴小結(jié)的增生性變化更顯著。 血清chIL-6活性檢測(cè)結(jié)果表明：自接

5、種后1d開(kāi)始，感染對(duì)照組血清chIL-6活性一直呈上升趨勢(shì)，并于接種后14d達(dá)到最高值23.25U/mL，隨后逐漸降低，其血清IL-6活性與空白對(duì)照組比較，接種后1、4、28、35d差異顯著(p＜0.05)，7、14、21d差異極顯著(p＜0.01)。左旋氧氟沙星治療組治療后1d血清chIL-6活性降至最低值3.90U/mL，隨后呈上升趨勢(shì)，但與空白對(duì)照組和藥物對(duì)照組比較均無(wú)差異顯著性，與感染對(duì)照組比較，治療后1、4d差異顯著(p＜0.

6、05)，治療后11、18d差異極顯著(p＜0.01)。試驗(yàn)期間藥物對(duì)照組與空白對(duì)照組血清chIL-6活性無(wú)差異顯著性(p＞0.05)。 血清chIL-6濃度檢測(cè)結(jié)果表明：接種后感染對(duì)照組血清chIL-6濃度顯著高于空白對(duì)照組，在接種后1、35d差異顯著(p＜0.05)，4、7、14、21、28d差異極顯著(p＜0.01)。左旋氧氟沙星治療組治療后血清chIL-6濃度逐漸降至正常水平，與空白對(duì)照組和藥物對(duì)照組比較均無(wú)差異顯著性，與

7、感染對(duì)照組比較，治療后4、25、32d差異顯著(p＜0.05)，治療后1、11、18d差異極顯著(p＜0.01)。試驗(yàn)期間藥物對(duì)照組與空白對(duì)照組血清chIL-6濃度無(wú)差異顯著性(p＞0.05)。 血清chIL-6活性與濃度相關(guān)性分析表明：血清chIL-6活性與濃度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r為0.910。 由此作者認(rèn)為在雞葡萄球菌性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，金葡菌進(jìn)入機(jī)體后，隨血液循環(huán)到達(dá)體內(nèi)特定部位繁殖，并分泌大量的胞外毒素，金