小鼠TLR-2的克隆、表達(dá)及其抗體的生物活性研究.pdf

1、哺乳動物Toll like receptors(TLRs)是果蠅Toll的同系物,它們構(gòu)成一個新的蛋白家族,參與天然免疫的介導(dǎo)和獲得性免疫的激活.自1997年發(fā)現(xiàn)第一個哺乳動物TLRs以來,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了小鼠的TLRs有9個(即mTLR1-9);人的TLRs有10個(即TLR1-10)中.研究表明,TLRs家族的作用并不僅限于抗感染免疫,還可參與抗原遞呈、誘導(dǎo)免疫耐受、細(xì)胞凋亡,并以此在自身免疫病、超敏反應(yīng)、移植排斥及腫瘤免疫中發(fā)揮作用.在

2、過去幾年中,TLR-2作為脊椎動物蛋白TLR家族的一員,得到廣泛的研究.TLR-2可介導(dǎo)多種不同的病原微生物(尤其是革蘭氏陽性菌、分枝桿菌及螺旋體等)及其產(chǎn)物引起的、性質(zhì)相似的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活動及細(xì)胞因子產(chǎn)生.因此,TLR-2被認(rèn)為是具中心作用的或中樞型識別(central pattern recognition)受體.盡管有許多體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了TLR-2參與免疫相關(guān)事件,但是來自體內(nèi)實(shí)驗(yàn)關(guān)于TLR-2功能的數(shù)據(jù)很少.小鼠和人的TLR-2都

3、是果蠅TLR-2的同源蛋白,兩者在氨基酸水平上有83％的同源性.基于mTLR-2與hTLR-2結(jié)構(gòu)的高度同源性,及在分布、生物學(xué)活性方面的諸多相似,小鼠無疑是研究TLR-2結(jié)構(gòu)、功能及其結(jié)合肽特性的良好模型.該研究擬對小鼠TLR-2進(jìn)行克隆、表達(dá)及其抗體的生物活性研究.首先對小鼠TLR-2的全基因及部分基因進(jìn)行克隆、表達(dá);制備抗mTLR-2胞外段B細(xì)胞識別表位抗體;在獲得了抗mTLR-2抗體的基礎(chǔ)上,進(jìn)行抗mTLR-2抗體抗過敏和腫瘤抑