抗TNF-α和IL-1βIgY抗體抗豚鼠過敏性支氣管哮喘的實驗研究.pdf

1、目的： 探討抗TNF-α和IL-1βIgY抗體霧化吸入表面用藥治療過敏性支氣管哮喘的作用機制。 方法： 應用卵清白蛋白霧化吸入法建立穩(wěn)定的Hartley豚鼠過敏性支氣管哮喘模型，隨機分為四組：正常對照組(A組)；過敏性支氣管哮喘模型組(B組)；0.1％抗TNF-α和IL-1β IgY抗體霧化吸入治療組(C組)；1.0％的抗TNF-α和IL-1β IgY抗體霧化吸入治療組(D組)。肉眼觀察各組動物飲食、活動、抓鼻、

2、咳嗽、噴嚏等過敏行為變化；并于治療后2h、4h、8h、24h處死各組動物，觀察肺色澤、大小等；取右肺肺尖、肺體、肺底做病理切片。HE染色觀察肺泡上皮細胞、肺泡壁結(jié)構(gòu)、毛細血管密度、形態(tài)、管腔通暢及粘膜水腫情況、支氣管周圍浸潤的炎性細胞種類、數(shù)量以及肺泡腔內(nèi)容物情況；使用生理鹽水對左肺行支氣管肺泡灌洗，收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，離心后取沉淀細胞做細胞涂片，Wright's染色計數(shù)嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等；以L

3、owrys法測量BALF上清液中總蛋白含量。用雙抗夾心ELISA法測定上清液中TNF-α、IL-1、IL-4、IL-8、IL-10、IL-13、細胞因子含量。統(tǒng)計各時間點、各組細胞因子與總蛋白之間的比值數(shù)據(jù)。 結(jié)果： 行為學變化：抗TNF-α和IL-1β IgY抗體治療組豚鼠行為、活動、飲食等于治療三天后基本趨于正常。 肺組織病理生理學改變：A組各時間點的肺組織光鏡可見肺泡管和肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔內(nèi)清潔透亮，肺

4、泡上皮細胞排列有序，與毛細血管及其他間質(zhì)成份構(gòu)成完整的肺泡呼吸膜；肺泡壁毛細血管密集，管腔通暢，可見形態(tài)規(guī)則的紅細胞游于其中。B組各時間點的肺組織光鏡可見肺泡管和肺泡壁結(jié)構(gòu)受損，滿視野肺泡腔內(nèi)充滿滲出液，可見壞死脫落的肺泡上皮細胞和滲出的白細胞；肺間質(zhì)水腫、炎性細胞浸潤致肺泡壁增厚、肺泡壁毛細血管扭曲或擴張淤血，并伴有白細胞嵌塞和紅細胞淤積，有效血流的毛細血管顯著減少。C組和D組經(jīng)不同濃度的抗TNF-α和IL-1β抗體霧化吸入治療后肺泡

5、管和肺泡壁結(jié)構(gòu)受損程度輕于B組，肺泡腔內(nèi)偶見有極少量炎癥細胞游于其中，支氣管管腔及肺泡中粘稠的粘液栓較B組明顯減少且支氣管管腔較為規(guī)則，周圍少見炎性細胞浸潤，支氣管粘膜上皮修復現(xiàn)象明顯。C、D組間未見有顯著區(qū)別。肺灌洗液細胞學變化：與B組相比，C組肺灌洗液中嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞數(shù)量較哮喘模型組顯著下降(2h、4h、8h，P<0.05)；巨噬細胞顯著上升(2 h、4 h、8 h，P<0.05)。D組肺灌洗液中嗜酸性粒細胞數(shù)量

6、較B組顯著下降(2 h、4 h、8 h，P<0.05)，中性粒細胞數(shù)量也顯著低于B組(2 h、8 h，P<0.05)，淋巴細胞含量較哮喘模型組顯著下降(2 h、8 h、24 h，P<0.05)，巨噬細胞顯著上升(2 h、8 h，P<0.05)。 細胞因子含量變化：與B組相比，C組和D組在治療2h后BALF每微克總蛋白(μg)中的IL-1含量(pg)明顯降低(B組：0.040±0.014，C組：0.013±0.001，D組：0.0

7、19±0.006)，IL-8含量明顯降低(B組：0.162±0.192，C組：0.015±0.001，D組0.025±0.007)，而IL-4含量僅在C組明顯降低(B組：0.104±0.011，C組：0.052±0.036)。治療4h后與B組相比，C組IL-1含量降低(B組：0.023±0.007，C組：0.015±0.002)，IL-4含量降低(B組：0.094±0.046，C組0.076±0.055)，IL-8含量降低(B組：0.0

8、28±0.009，C組：0.017±0.003)，IL-13含量降低(B組：0.030±0.010，C組：0.018±0.009)，TNF-α含量降低(B組：0.072±0.012，C組：0.063±0.035)，而IL-10明顯低于D組(B組：0.242±0.102，D組：0.337±0.103)。治療8h后與B組相比，C組IL-10含量顯著升高(B組：0.402±0.098，C組2.846±0.445，P<0.05)，D組IL-10

9、含量也有所升高(D組0.497±0.289)，D組TNF-α降低(B組：0.100±0.019，D組0.084±0.014)。治療24h后與B組相比，C組IL-1含量明顯降低(B組：0.028±0.012，C組：0.011±0.005)，IL-4含量明顯降低(B組：0.181±0.086，C組0.070±0.010)，IL-8含量降低(B組：0.027±0.005，C組：0.018±0.006)，IL-13含量明顯降低(B組：0.034

10、±0.010，C組：0.017±0.004)，TNF-α含量降低(B組：0.102±0.034，C組：0.077±0.029)；D組IL-10含量明顯升高(B組：0.365±0.247，D組0.765±0.264)，TNF-α含量降低(B組：0.102±0.034，D組0.088±0.020)。 8h后C組與B組IL-10含量與IL-1含量的比值(42.75:19.14)、與IL-4含量的比值(5.16:2.73)、與IL-8含

11、量的比值(36.49:16.08)、與IL-13含量的比值(23.92:10.58)、與TNF-α的含量比值(4.87:4.02)顯著或明顯升高；8h后D組與B組僅IL-10含量與TNF-α含量的比值稍高(5.92:4.02)。24h后C組與B組IL-10含量與IL-1含量的比值(25.64:13.04)、與IL-4含量的比值(4.03:2.02)、與IL-8含量的比值(15.67:13.52)、與IL-13含量的比值(16.59:10

12、.74)顯著或明顯升高；24h后D組與B組IL-10含量與IL-1含量的比值(14.17:13.04)、與IL-4含量的比值(3.12:2.02)、與IL-8含量的比值(15.30:13.52)、與IL-13含量的比值(21.25:10.74)、與TNF-α含量的比值(8.69:3.58)顯著或明顯升高。 結(jié)論： 本實驗從動物整體行為表現(xiàn)、炎癥病理組織切片觀察、炎性細胞(嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞)以及炎性細胞因

13、子(IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-8、IL-13)和抗炎細胞因子(IL-10)在BALF中的含量變化的研究，初步探討了前炎性細胞因子在過敏性支氣管哮喘中的作用及與其他細胞因子的相互關系，以及不同濃度的抗TNF-α和IL-1β IgY抗體霧化吸入治療過敏性支氣管哮喘模型豚鼠中的作用機制，并初步證明TNF-α和IL-1β在過敏性支氣管哮喘中起著關鍵作用，是炎性細胞因子網(wǎng)的啟動因子，加速和加強因子，以及組織損傷因子。 抗TN

14、F-α和IL-1β IgY抗體霧化吸入治療模型豚鼠過敏性支氣管哮喘能夠明顯減輕模型豚鼠過敏性支氣管哮喘的癥狀及炎癥病理改變的嚴重程度，同時顯著或明顯地減少BALF中的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞，降低IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-8、IL-13含量、提高IL-10/IL-1β、IL-10/TNF-α、IL-10/IL-4、IL-10/IL-8、IL-10/IL-13的比值，增加IL-10含量，從而減輕過敏性支氣管哮喘的癥