NDRG1基因與乳腺癌生物學(xué)行為相關(guān)性及其機制研究.pdf

1、乳腺癌的發(fā)病率和死亡率逐年升高，是嚴重威脅女性身心健康的惡性腫瘤之一，而乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響其療效的主要因素。因此，迫切需要尋找一個敏感、能早期預(yù)測乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)記物及抑制其轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的基因治療靶點，為臨床對乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移作出早期預(yù)測提供一定的參考依據(jù)，從而有助于及時采取更加有效的治療措施。 人NDRGl(N-mycDownstreamRegulatedGene1)是由5組研究人員于近年相繼獨立發(fā)現(xiàn)和分離的與惡性

2、腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因。NDRGl定位于人染色體8q24．2，cDNA全長¨82bp，其編碼的蛋白質(zhì)分子量為43kDa。有學(xué)者在膀胱癌、結(jié)腸癌和前列腺癌中對NDRGl與腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系進行了研究，但該基因與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性究竟如何，尚存在很大爭議。尤其對NDRGl與乳腺癌生物學(xué)行為相關(guān)性的探討，目前國內(nèi)、外還沒有系統(tǒng)的研究報道，更未見到有關(guān)其抑制癌細胞轉(zhuǎn)移的分子機制的研究報道。 本課題試圖從臨床人體乳腺癌組織、細

3、胞株和裸鼠乳墊下移植瘤三方面對NDRGl基因表達與乳腺癌生物學(xué)行為的相關(guān)關(guān)系及其作用的分子機制進行研究，以尋找預(yù)測乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)記物及其分子治療的新靶點。 第一部分人體乳腺癌組織和乳腺癌細胞株中NIDRGl表達與腫瘤 轉(zhuǎn)移的相關(guān)關(guān)系研究 目的：探討人體乳腺癌組織和乳腺癌細胞株中NDRGl表達與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)關(guān)系。 方法：采用免疫組織化學(xué)、realtimeRT-PCR檢測人體乳腺癌組織和乳腺癌細胞

4、株中NDRGl蛋白和mRNA的表達。 結(jié)果：與無轉(zhuǎn)移病例的乳腺癌組織相比，在有轉(zhuǎn)移病例的乳腺癌組織中，NDRGl蛋白和mRNA表達均明顯降低，僅相當(dāng)于前者的47．7％、20．33％(P

5、相關(guān)關(guān)系，提示該基因可望成為預(yù)測乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)記物。 第二部分過表達NDRGl對MDA-MB-231細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的體內(nèi)、外影響 目的：探討過表達NDRGl對MDA-MB-231細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的體內(nèi)、外影響。 方法：重組真核表達質(zhì)粒pEGFP-NDRGl．N3脂質(zhì)體法穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，用RT-PCR、westernblot、免疫熒光法進行克隆鑒定，篩選出穩(wěn)定過表達ND

6、RGl的細胞株。用BrdU摻入法、流式細胞術(shù)檢測NDRGl過表達對MDA-MB-231細胞增殖和細胞周期的影響；細胞體外侵襲實驗和遷移實驗檢測NDRGl過表達后MDA-MB-231細胞侵襲和遷移能力的變化。同時建立裸鼠乳墊下移植瘤模型，觀察NDRGl過表達對移植瘤的生長速度和侵襲轉(zhuǎn)移的影響。 結(jié)果：獲得穩(wěn)定高表達NDRGl的MDA-MB-231細胞克隆pEGFP-NDRGl-N3。體外實驗表明，與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染pEGFP-N3空

7、載組相比，pEGFP-NDRGl—N3組細胞BrdU摻入率明顯降低，細胞周期Go／Gl期比例增高，S期比例明顯減低。與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染pEGFP-N3空載組相比，pEGFP-NDRGl一N3組體外侵襲能力降低為前者的72．3％、76．7％(P<0．05)，而體外遷移能力的改變則未見顯著性差異。在裸鼠移植瘤實驗中發(fā)現(xiàn)，pEGFP-NDRGl一N3組裸鼠乳摯下移植瘤生長較pEGFP-N3組明顯緩慢，腫瘤重量明顯減輕，侵襲性明顯下降。

8、結(jié)論：NDRGl過表達在體內(nèi)、外均能抑制人乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖、侵襲能力和轉(zhuǎn)移潛能。 第三部分過表達NDRGI影響MDA-MB-231細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機制的初步探討 目的：初步探討過表達NDRGl影響MDA-MB-23l細胞侵襲和轉(zhuǎn)移作用的分子機制。 方法：采用realtimeRT-PCR、westernblot檢測NDRGl過表達后MDA-MB-231細胞中MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白