吉非替尼序貫與聯(lián)合培美曲塞或欖香烯乳抑制肺腺癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的研究.pdf

1、目的：
　　 (1)通過(guò)體外研究吉非替尼序貫或聯(lián)合培美曲塞對(duì)EGFR不同類(lèi)型的人肺腺癌細(xì)胞A549、PC-9的生長(zhǎng)抑制作用及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，探索吉非替尼與培美曲塞的最佳用藥方式。
　　 (2)通過(guò)體外研究吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對(duì)EGFR不同類(lèi)型的人肺腺癌細(xì)胞A549、PC-9的生長(zhǎng)抑制作用及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，探討欖香烯乳對(duì)吉非替尼能否起到增效、增敏作用，以及兩藥聯(lián)用的最佳方式。
　　 方法：
　　

2、 體外培養(yǎng)EGFR野生型人肺腺癌細(xì)胞A549及EGFR突變型人肺腺癌細(xì)胞PC-9，通過(guò)不同方法分別檢測(cè)吉非替尼與培美曲塞、吉非替尼與欖香烯乳序貫或聯(lián)合對(duì)兩種細(xì)胞系的生長(zhǎng)抑制及誘導(dǎo)凋亡作用，具體包括：(1)MTT法檢測(cè)不同濃度和作用時(shí)間的吉非替尼、培美曲塞及欖香烯乳單藥對(duì)細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)，繪制濃度-生長(zhǎng)抑制曲線，計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50);(2)MTT法檢測(cè)吉非替尼序貫或聯(lián)合培美曲塞、吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對(duì)兩種細(xì)胞的增殖抑制作

3、用，采用兩藥相互作用系數(shù)(CDI)和合用指數(shù)(CI)評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)組兩藥相互作用性質(zhì)；(3)Annexin-VFITC/PI雙標(biāo)記染色法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組對(duì)細(xì)胞凋亡的影響：(4)原位末端標(biāo)記法(TUNEL)觀察各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分：(1)吉非替尼和培美曲塞單藥對(duì)人肺腺癌細(xì)胞PC-9、A549的增殖抑制效應(yīng)呈濃度與時(shí)間依賴(lài)性。吉非替尼作用于PC-9細(xì)胞(EGFR突變型)72h時(shí)的IC50為0.044

4、±0.002μmol/L，作用于A549細(xì)胞(EGFR野生型)72h時(shí)的IC50為8.642±0.261μmol/L，其值是前者IC50的近200倍。培美曲塞對(duì)PC-9及A549細(xì)胞72h的IC50分別為0.346±0.104μg/ml和0.982±0.111μg/ml。(2)吉非替尼聯(lián)合培美曲塞、培美曲塞序貫吉非替尼均可以增強(qiáng)吉非替尼和培美曲塞兩藥對(duì)兩種細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)，且與兩單藥相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而吉非替尼

5、序貫培美曲塞的生長(zhǎng)抑制率較兩單藥降低。對(duì)EGFR突變型人肺腺癌細(xì)胞PC-9，吉非替尼聯(lián)合培美曲塞組的生長(zhǎng)抑制率高于培美曲塞序貫吉非替尼組(P＜0.05)，且聯(lián)合組兩藥具有相加性；對(duì)EGFR野生型人肺腺癌細(xì)胞A549，培美曲塞序貫吉非替尼給藥對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用優(yōu)于吉非替尼聯(lián)合培美曲塞組(P＜0.05)，且培美曲塞序貫吉非替尼組兩藥具有相加性。(3)吉非替尼聯(lián)合培美曲塞對(duì)PC-9細(xì)胞的總凋亡率最高，與兩單藥組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

6、05)；培美曲塞序貫吉非替尼對(duì)A549細(xì)胞的總凋亡率最高，與其它各組相比差異顯著（P＜0.05）：吉非替尼序貫培美曲塞對(duì)兩種細(xì)胞的凋亡率低于兩單藥。
　　 第二部分：(1)吉非替尼和欖香烯乳單藥對(duì)人肺腺癌細(xì)胞PC-9、A549的增殖抑制效應(yīng)呈濃度與時(shí)間依賴(lài)性。欖香烯乳對(duì)PC-9及A549細(xì)胞72h的IC50分別為26.461±2.309μg/ml和27.830±0.614μg/ml。(2)吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對(duì)兩種細(xì)胞的增

7、殖抑制效應(yīng)均較兩單藥增加，且呈現(xiàn)吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳＞欖香烯乳序貫吉非替尼＞吉非替尼序貫欖香烯乳的特點(diǎn)。吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳組對(duì)PC-9和A549細(xì)胞的抑制率與其它各組相比差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且聯(lián)合組兩藥表現(xiàn)為協(xié)同性。在PC-9和A549細(xì)胞中，吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳后吉非替尼的IC50較吉非替尼單用時(shí)分別降低了68.33％和69.16％。(3)吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對(duì)兩種細(xì)胞的凋亡率均有所增加，吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳

8、給藥的誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)最明顯，與其它各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 第一部分：吉非替尼聯(lián)合培美曲塞、培美曲塞序貫吉非替尼均可以增強(qiáng)吉非替尼和培美曲塞兩藥對(duì)PC-9和A549細(xì)胞的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)，吉非替尼序貫培美曲塞反而降低兩藥對(duì)兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率及凋亡率。對(duì)EGFR突變型人肺腺癌細(xì)胞PC-9，吉非替尼聯(lián)合培美曲塞的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡作用更顯著：對(duì)EGFR野生型人肺腺癌細(xì)胞A549，培