Mocsin在人腦形細(xì)胞瘤中的表達(dá)和意義及其對(duì)U251細(xì)胞增殖和侵襲的影響.pdf

1、第一章 Moesin在人腦星形細(xì)胞瘤的表達(dá)及意義。
　　 目的：探討膜結(jié)構(gòu)伸展刺突蛋白(Moesin)在人腦星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義。
　　 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP方法，檢測(cè)56例人腦星形細(xì)胞瘤和10例正常腦組織中Moesin和Phospho-Moesin的表達(dá)，應(yīng)用RT-PCR測(cè)定15例新鮮人腦星形細(xì)胞瘤和2例正常腦組織中Moesin的mRNA，并結(jié)合臨床隨訪資料分析表達(dá)水平與星形細(xì)胞瘤臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　

2、　 結(jié)果：Moesin的陽性表達(dá)率在人腦星形細(xì)胞瘤組96.4％(54/56)和正常腦組織對(duì)照組0％(0/10)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。Ⅰ-Ⅳ級(jí)星形細(xì)胞瘤中Moeisn的強(qiáng)陽性表達(dá)隨腫瘤分級(jí)上升而增高(x2=33.93，P<0.01)，Phospho-Moesin的表達(dá)結(jié)果與Moesin的結(jié)果基本一致。RT-PCR檢測(cè)正常腦組織，Ⅰ-Ⅱ級(jí)星形細(xì)胞瘤，和Ⅲ-Ⅳ級(jí)星形細(xì)胞瘤3組之間Moesin的mRNA表達(dá)依次增高，表達(dá)水平之間有

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=66.133，Sig=0.000)。結(jié)合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)Moesin的強(qiáng)陽性表達(dá)和星形細(xì)胞瘤分化之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Moesin強(qiáng)陽性表達(dá)組患者比弱陽性+陰性表達(dá)組患者的術(shù)后無瘤生存時(shí)間短，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=29.85，P=0.000)。
　　 結(jié)論：Moesin的表達(dá)水平與人腦星形細(xì)胞瘤的惡性程度密切相關(guān)，Moesin的過度表達(dá)對(duì)星形細(xì)胞瘤發(fā)展和預(yù)后起重要作用，提示Moesin可以作為

4、反映星形細(xì)胞瘤預(yù)后的一種有價(jià)值的分子標(biāo)志物。
　　 第二章 siRNA干擾下調(diào)Moesin表達(dá)對(duì)U251細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲能力的影響。
　　 目的：本研究旨在探討RNA干擾(RNA interference，RNAi)對(duì)人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤(U251)中Moesin蛋白基因表達(dá)的抑制作用及其對(duì)U251細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲的影響。
　　 方法：以人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤U251細(xì)胞系為研究對(duì)象，針對(duì)Moesin編碼基因設(shè)計(jì)小于擾RNA(si

5、RNA)片段，轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)篩選沉默效率最高的siRNA片段，并用Western Blot技術(shù)定量轉(zhuǎn)染后U251細(xì)胞的Moesin蛋白的表達(dá)水平。轉(zhuǎn)染后以MTT法檢測(cè)增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡水平，Transwell法檢測(cè)侵襲能力的變化，并以掃描電鏡觀察轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞形態(tài)變化。
　　 結(jié)果：RT-PCR和Western-blot篩選出MOESIN-139片段沉默效果最好，siRNA轉(zhuǎn)染后

6、U251細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢，在轉(zhuǎn)染48h時(shí)，siRNA組的U251細(xì)胞明顯生長(zhǎng)速度低于空白組和陰性對(duì)照組(P<0.01)，同時(shí)凋亡率上升，siRNA組平均凋亡率為(17.30±2.01)％，遠(yuǎn)高于空白組平均凋亡率1(1.95±0.33)％，陰性組平均凋亡率(2.02±0.28)％(P<0.01)。siRNA轉(zhuǎn)染后的U251細(xì)胞穿過聚碳酯膜的細(xì)胞數(shù)量也明顯減少，由空白組26.47±4.07和陰性組的24.27±3.63減少到轉(zhuǎn)染組的11.5

7、3±2.61(P<0.01)。細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞表面?zhèn)巫銛?shù)由空白組的14.2±2.58，陰性組的15.8±1.30下降至轉(zhuǎn)染組的6.6±1.82(P<0.01)。
　　 結(jié)論：siRNA下調(diào)Moesin的表達(dá)能有效抑制U251細(xì)胞的生長(zhǎng)，減低其侵襲性；Moesin有可能成為治療人腦膠質(zhì)瘤的靶點(diǎn)分子。
　　 第三章 siRNA干擾下調(diào)Moesin表達(dá)導(dǎo)致U251細(xì)胞生長(zhǎng)侵襲能力下降與PDGF和CD44關(guān)系的研究。

8、>　　 背景與目的：本研究旨在探討Moeisn蛋白參與影響人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤(U251)生長(zhǎng)和侵襲可能途徑。
　　 方法：以人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤U251細(xì)胞系為研究對(duì)象，針對(duì)Moesin編碼基因設(shè)計(jì)小干擾RNA片段轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)篩選沉默效率最高的siRNA片段進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過對(duì)設(shè)計(jì)的3組不同干預(yù)的U251細(xì)胞(空白組，陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染組)進(jìn)行RT-PCR測(cè)定PDGF的表達(dá)，以及流式細(xì)胞方法測(cè)定CD4

9、4的量。
　　 結(jié)果：RT-PCR發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組U251細(xì)胞中PDGF的mRNA的平均表達(dá)為0.09377±0.008546，遠(yuǎn)低于空白組0.4663±0.01844和陰性對(duì)照組0.4570±0.02159，其差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；流式檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組中CD44的表達(dá)最低26.73±2.720％與其他2組差異明顯(F=173.669，sig=0.000)。
　　 結(jié)論：U251細(xì)胞中Moesin表達(dá)下降將導(dǎo)致P