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文檔簡介
1、目的: 本實(shí)驗(yàn)通過胃粘膜取材建立等位基因特異性引物一聚合酶鏈反應(yīng)法(ASP-PCR)檢測H.pylori23S rRNA基因2142及2143位置上SNPs,進(jìn)而獲知H.pylori的突變耐藥情況;建立巢式PCR方法檢測牙菌斑中H.pylori的感染及其23SrRNA基因突變情況。 方法: 1、采集2006年6月至2006年11月因上消化道癥狀行胃鏡檢查的患者83例,其中包括16例慢性胃炎、60例潰瘍和7例胃癌患
2、者,男性49例,平均年齡為47歲。H.pylori的診斷依據(jù)快速尿素酶試驗(yàn)、組織學(xué)檢查及<'14>C呼氣試驗(yàn),此三項(xiàng)中兩項(xiàng)陽性為H.pylori陽性患者,兩項(xiàng)陰性為H.pylori陰性患者。83例患者(65例H.pylori陽性,18例H.pylori陰性)的胃粘膜提取DNA,均經(jīng)過ASP-PCR和巢式PCR兩種方法擴(kuò)增,巢式PCR產(chǎn)物經(jīng)BsaI和BbsI進(jìn)行酶切。采用SPSSl2.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,兩種方法陽性率的比較采用x <'
3、2>檢驗(yàn)。 2、收集<'14>C呼氣試驗(yàn)和快速尿素酶試驗(yàn)均為H.pylori陽性的患者45例,包括慢性淺表性胃炎23例,十二指腸潰瘍22例。取其牙菌斑,提取DNA,用巢式PCR方法擴(kuò)增H.pylori23S rRNA的425bp片段,陽性結(jié)果用限制性內(nèi)切酶BsaI和BbsI進(jìn)行酶切。 結(jié)果: 1、采用ASP-PCR法65例H.pylori陽性患者58例為野生株,1例發(fā)生A2143G突變,6例為野生株與A2143
4、G突變株的混合株。所有突變株均經(jīng)測序證實(shí)。突變率10.8%,準(zhǔn)確性100%。巢式PCR法擴(kuò)增65例H.pylori陽性患者56例為陽性,18例H.pylori陰性患者17例為陰性。對57例巢式PCR陽性產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切分析,有7例被Bsa I切開,表明存在A2143G的突變,無一例被Bbs I識別。所有突變株均經(jīng)測序證實(shí)。 2、45例H.pylori陽性患者25例牙菌斑在第一輪PCR擴(kuò)增出了H.pylori 23S rRNA
5、617bp的片斷,(陽性擴(kuò)增率為55.6%),而28例在第二輪PCR擴(kuò)增出了425bp的片段(陽性擴(kuò)增率為62.2%)。對28例巢式PCR陽性產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切分析,有1例被Bsa I切開,表明存在A2143G的突變,無一例被Bbs I識別。所有突變株均經(jīng)測序證實(shí)。 結(jié)論: 1、采用ASP-PCR方法可以簡便的檢測到胃粘膜中H.pylori23S rRNA的SNPs(2142、2143位置上腺嘌呤突變?yōu)轼B嘌呤),不需要酶
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