幽門螺桿菌毒力基因及克拉霉素耐藥基因研究.pdf

1、幽門螺桿菌(Helicobacter pyloir,HP)是慢性胃炎和消化性胃潰瘍的主要病因,與胃癌和胃粘膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)。HP的細胞毒素相關(guān)基因A(cytotoxin associated gene A,cagA)及空泡毒素基因A(vaculating toxin gene A,vacA)作為HP重要的毒力基因結(jié)構(gòu),能夠產(chǎn)生相應的毒力因子,在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,決定著HP的致病性。研究已證實

2、,根治和清除HP不僅有利于潰瘍的治愈,而且可以防止?jié)儚桶l(fā)。但隨著以克拉霉素為主的大環(huán)內(nèi)酯類藥物的廣泛應用,HP的耐藥己成為臨床治療中的難題。
　　 目的:本論文通過對慢性淺表性胃炎(CSG)患者胃液中幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,HP)毒力基因細胞毒素相關(guān)基因(cagA)、空泡毒素基因(vacA)的檢測,研究cagA、vacA基因及其多態(tài)性,探討本實驗組胃炎患者感染HP的主要基因型,并為HP的基因分型研究

3、提供流行病學資料;采用巢式PCR的方法,檢測HP耐藥基因23S Rrna,并用限制性內(nèi)切酶對突變位點A2143G、A2142G進行酶切分析,以評估克拉霉素的耐藥情況,并對HP感染性疾病的臨床治療及療效動態(tài)觀察提供幫助。
　　 方法:收集慢性淺表性胃炎患者胃液HP陽性標本,共計65份。采用聚合酶鏈式反應(PCR)、瓊脂糖凝膠電泳、酶切等分子生物學手段檢測HPcagA、vacA基因及23S Rrna基因突變位點,并對vacA基因陽性

4、者進行分型研究。
　　 結(jié)果:165份HP陽性標本,cagA檢出率為67.69％(44/65),vacA為100％(65/65)。
　　 2 vacA基因各亞型檢出率分別為s186.15％(56/65);s213.85％(9/65);m147.69％(31/65);m252.31％(34/65)。以s1檢出率最高。
　　 3 vacA基因各組合型檢出率分別為s1/m147.69％(34/65);s1/m238.4

5、6％(25/65);s2/m213.85％(9/65);未檢出s2/m1型。以vacAs1/m1檢出率最高。
　　 4采用巢式PCR的方法,對HP23S Rrna基因進行兩次PCR擴增,有32例存在陽性條帶(擴增率為49.23％),用Bsa I、Bbs I進行酶切分析,均未被識別。
　　 結(jié)論:1本次研究中,HP cagA基因存在于67.69％的HP中,而vacA基因存在于所有HP中。檢出的HP大約70％同時攜帶cagA