天麻共生蜜環(huán)菌及同屬真菌的基因系譜學(xué)及藥用成分的研究.pdf

1、蜜環(huán)菌屬[Armillaria(Fr.：Fr)Staude.]真菌是一類有著重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的真菌。是世界上最大的生物。這類真菌在全球范圍內(nèi)都有分布，其中大部分是林業(yè)的病害菌，危害森林和果樹，也有可與傳統(tǒng)中藥天麻共生并提供其營(yíng)養(yǎng)的蜜環(huán)菌(以下簡(jiǎn)稱為天麻蜜環(huán)菌)。蜜環(huán)菌屬真菌形態(tài)變異很大，以至于該屬的分類一直比較混亂。天麻蜜環(huán)菌是伴栽天麻所必須的，又是一種藥食兩用菌，并且作為商業(yè)種在市場(chǎng)上銷售，澄清其分類顯得至關(guān)重要；臨床證明天麻蜜環(huán)菌與天麻

2、具有相似的藥效，但目前有關(guān)兩者間是否具有相同成分還未見(jiàn)報(bào)道。所以探索天麻蜜環(huán)菌中的藥效成分也很有意義。　　基于以上兩點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)來(lái)源不同的天麻蜜環(huán)菌的核糖體rRNA基因內(nèi)間隔轉(zhuǎn)錄區(qū)(internaltranscribedspacer,ITS)，基因間隔區(qū)(intergenicspacers，IGS)以及核糖體大亞基(largesubunit(28s)ofribosomalRNAgenes)進(jìn)行擴(kuò)增，并對(duì)序列與從Genebank中下載的

3、相關(guān)序列進(jìn)行系統(tǒng)學(xué)研究，并且對(duì)這些天麻蜜環(huán)菌的生物學(xué)特性以及多糖的含量做了相應(yīng)的研究，最后，為了檢測(cè)天麻蜜環(huán)菌中是否含有與天麻相同的物質(zhì)，選用天麻素作為指標(biāo)，天麻樣品作為對(duì)照，采用高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)檢測(cè)。 本論文旨在對(duì)天麻共生蜜環(huán)菌的系譜學(xué)進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)采用核酸序列分析法，擴(kuò)增并測(cè)序了19株來(lái)源不同的天麻蜜環(huán)菌的ITS，IGS1以及28SrDNA區(qū)段

4、，根據(jù)所得數(shù)據(jù)和GeneBank中的已知相關(guān)序列來(lái)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，分析方法采用maximumparsimony,maximumlikelihoodandneighbour-joining法。所有供試菌株在28SrRNAgene序列區(qū)段高度保守，而從ITS以及IGS序列排序中可以發(fā)現(xiàn)有個(gè)別堿基的轉(zhuǎn)換或顛換，插入或缺失。結(jié)果表明：系統(tǒng)發(fā)育樹顯示表明19株菌株均確定為蜜環(huán)菌屬真菌，而其中只有菌株AM234確定到種，與Armillariamel

5、lea為同一種。推測(cè)天麻共生蜜環(huán)菌不只是Armillariamellea，可能存在多個(gè)種，并且是與A.hinnulea，A.tabesce,A.mellea，A.limonea距離較遠(yuǎn)的種；BY1，BY2，DZ這三株菌株為密切相關(guān)的一族，這三株菌株，分離自貴州省百宜和道真天麻。IGS1比ITS鑒別蜜環(huán)菌屬真菌種及種下的能力強(qiáng)，而28SrDNA區(qū)段則由于太保守而不適合做蜜環(huán)菌屬真菌種及種下的分析；旨在對(duì)所選天麻蜜環(huán)菌菌索的多糖含量進(jìn)行初步

6、的評(píng)價(jià)，篩選出多糖含量較高的菌株，為商業(yè)化生產(chǎn)進(jìn)行提供基礎(chǔ)研究。實(shí)驗(yàn)采用蒽酮-硫酸法測(cè)定不同來(lái)源蜜環(huán)菌菌株菌索的多糖含量。結(jié)果表明：所有菌株都含有多糖，但差異較大。菌株中多糖含量低的是AM234和5-722，含量分別為52.37645mg/g和49.51301mg/g；多糖含量最高的是來(lái)自于青海的XB-3，含量為145.3466mg/g，大約為AM234的3倍，其它菌株含量在90-117mg/g之間；旨在從蜜環(huán)菌中找到與天麻相同的物質(zhì)，

7、由于天麻素為藥典中規(guī)定的天麻藥用成分，所以選用測(cè)定天麻素為指標(biāo)，采用HPLC法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：部分蜜環(huán)菌菌索中含有天麻素，而且含量還有差異，含量較高的有3個(gè)，分別是：DZ為0.403mg/g，AM234為0.365mg/g，BY1為0.331mg/g；含量較低的XB-6為0.131mg/g，XB-4為0.258mg/g，XB-1為0.070mg/g，，在對(duì)照品天麻中天麻素含量為1.661mg/g，約為DZ的4倍。在蜜環(huán)菌中發(fā)現(xiàn)天麻素，目