積雪草對(duì)UUO大鼠腎組織MMP-2-TIMP-2、colⅣ表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：研究在成年SD大鼠腎間質(zhì)纖維化模型-單側(cè)輸尿管梗阻模型(Unilateral Ureteral Obstruction UUO)中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2/TIMP-2)和Ⅳ型膠原(Collage-n type Ⅳ)的組織定位及表達(dá)趨勢(shì),病理意義及與纖維化的相關(guān)性,探討腎小管間質(zhì)纖維化(tubulointerstital fibrosis,TIF)的部分發(fā)生機(jī)制及積雪草對(duì)TIF的干預(yù)效果,為臨床應(yīng)用及新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

2、
　　方法：采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎方法制備大鼠腎間質(zhì)纖維化模型,將96只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、模型組(UUO)、積雪草小劑量組(UUO+Jl)、積雪草中劑量組(UUO+Jm)、積雪草大劑量組(UUO+Jh)、對(duì)照(福辛普利)(UUO+Mn)組,每組 16 只,除空白組外均成功建立 UUO 大鼠模型,治療組以術(shù)前 1天給予相應(yīng)劑量灌胃,假手術(shù)組及模型組分別灌入等量的生理鹽水；以第1 4、21天為觀察點(diǎn),各處死8只。①

3、腹主動(dòng)脈采血檢測(cè)肝腎功,留取24h尿量測(cè)總蛋白含量；②HE染色觀察梗阻腎臟病理變化、腎小管擴(kuò)張、萎縮程度；③Masson染色評(píng)價(jià)腎小管間質(zhì)纖維化的程度；④免疫組化檢測(cè)大鼠腎組織中MMP-2、TIMP-2及Co lⅣ蛋白的定位及表達(dá)趨勢(shì)。
　　結(jié)果：⑴大鼠UUO術(shù)后情況：14天、21天組因出血、感染各死亡1只；干預(yù)組及模型組術(shù)后5天后傷口愈合,生長發(fā)育正常、毛粗、光澤度和活動(dòng)度均稍有下降；⑵各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)生化指標(biāo)、24h 尿蛋白

4、定量均為陰性,與假手術(shù)組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；⑶常規(guī)HE及Masson染色：假手術(shù)組無明顯病理改變；U UO 組腎組織術(shù)后 1 4 天出現(xiàn)各級(jí)腎小管明顯的擴(kuò)張,部分小管萎縮,間質(zhì)內(nèi)有大量的炎性細(xì)胞浸潤,纖維素少量滲出,21天時(shí)腎小管萎縮、變性、壞死,腎間質(zhì)纖維化嚴(yán)重,間質(zhì)細(xì)胞增生,膠原纖維增多(P<0.05)；治療組較模型組有所減輕,但仍高于假手術(shù)組(P<0.05)；⑷免疫組化方法檢測(cè)腎臟MMP-2、TIMP-2及 Col

5、Ⅳ蛋白的定位及表達(dá)結(jié)果： ①大鼠腎組織 MMP-2 免疫組化染色結(jié)果：M MP-2主要表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞胞漿,胞核內(nèi)少量表達(dá),腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞有少量基礎(chǔ)表達(dá)；假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)無顯著差異(P>0.05)；UUO 組M MP-2 在術(shù)后 1 4 天出現(xiàn)強(qiáng)陽性表達(dá),呈片狀分布,其后隨著時(shí)間的延長,表達(dá)反而較前減少,仍高于假手術(shù)組(P<0.05),藥物干預(yù)組 MMP-2 的表達(dá)低于模型組(P<0.05),積雪草大劑量組中 MMP-

6、2 的表達(dá)與對(duì)照組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；②大鼠腎組織TIMP-2免疫組化染色結(jié)果：TIMP-2主要表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì),小血管內(nèi)皮細(xì)胞,平滑肌細(xì)胞少量表達(dá)；UUO組TIMP-2的表達(dá)隨腎間質(zhì)損傷程度加重而增多,藥物干預(yù)組 TIMP-2 的表達(dá)低于模型組(P<0.05),且呈明顯的劑量依賴關(guān)系,積雪草大劑量組TIMP-2的表達(dá)與對(duì)照組相比,二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。③Col-Ⅳ蛋白的表達(dá)：Col-Ⅳ主要表達(dá)