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文檔簡介
1、目的:觀察基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)在糖尿病大鼠腎組織中的表達(dá)及靈芝多糖干預(yù)后的影響。 方法:雄性清潔級(jí)Sprague-Dawley大鼠共70只,體重180~220g,全部在屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)。(1)實(shí)驗(yàn)分組:70只正常大鼠首先隨機(jī)分為正常對(duì)照組(C組)10只和糖尿病模型組60只,造模成功后的糖尿病模型組再隨機(jī)分為糖尿病未治療組(DM組,n=15)、靈芝多糖低劑量組(GL-1組,n=
2、15)、靈芝多糖中劑量組(GL-2組,n=15)及靈芝多糖高劑量組(GL-3組,n=15)。(2)建立模型:糖尿病模型組在禁食12h后于左下腹腔一次性注射STZ60mg/kg,72h后尾靜脈采血測隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L,持續(xù)3天以上作為模型納入本實(shí)驗(yàn)。血糖穩(wěn)定1周后GL-1、GL-2、GL-3組分別給予靈芝多糖水溶液100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg劑量進(jìn)行治療性灌胃,C組和DM組用等體積無菌水灌胃,持續(xù)8周。
3、(3)觀察指標(biāo):8周后,所有大鼠全部處死,觀察體重(BW)、腎重(KW)、腎臟指數(shù)(KI)、血糖(BG)、血脂(PF)、糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)、尿微量白蛋白(MAU)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)的變化,透射電鏡下觀察腎小球基底膜的厚度、系膜細(xì)胞增殖、上皮細(xì)胞足突等情況,免疫組化法觀察腎皮質(zhì)MMP-2、TIMP-2的表達(dá)變化。 結(jié)果: (1)一般情況:DM組大鼠在實(shí)驗(yàn)期間多飲
4、、多尿、多食、體重減輕、毛色無光澤、生長發(fā)育遲緩等癥狀十分明顯,GLP各組大鼠上述癥狀改善不明顯。 (2)常規(guī)生化指標(biāo):DM組與C組相比,BG、KI、GHbAlc、TC、BUN、MAU顯著升高,而BW明顯下降(P<0.01),TG、Scr各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),GLP各治療組較DM組BW增加,KI降低,TC、BUN、MAU指標(biāo)明顯改善,尤以靈芝高劑量組明顯(P<0.01),但BG、GHbAlc差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>
5、0.05)。 (3)一般形態(tài)學(xué)改變:DM 組大鼠較C組腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)顯著增多,毛細(xì)血管管腔狹窄,GLP各組較DM組上述病理改變有不同程度改善。 (4) 腎臟超微結(jié)構(gòu)改變:透射電鏡下顯示C組腎小球毛細(xì)血管基底膜呈線性狀,厚度均勻,足狀突起排列有序,無足突融合,系膜基質(zhì)不增多;DM組基底膜顯著增厚、不規(guī)則,并且可見上皮細(xì)胞的足突融合,系膜基質(zhì)顯著增多,腎小球基底膜(GBM)增厚,上述病理改變?cè)贕LP各組有不同程度的改善。
6、 (5)免疫組化:免疫組化染色顯示陽性顆粒主要定位于腎小球和腎小管,DM組與C組相比MMP-2降低而TIMP-2升高(P<0.01);GLP各組較DM組相比MMP-2均升高、TIMP-2不同程度降低(P<0.01)。 結(jié)論: (1)GLP 對(duì)糖尿病大鼠具有腎臟保護(hù)作用,且這種保護(hù)作用呈現(xiàn)劑量依賴趨勢。 (2)GLP對(duì)糖尿病大鼠的腎臟保護(hù)作用是獨(dú)立于血糖之外的。 (3)GLP對(duì)糖尿病腎病保護(hù)作用與降低T
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