SnoN蛋白在RPE細(xì)胞TGF-β-Smad信號(hào)通路中的作用.pdf

1、近視是目前全球發(fā)生率最高的屈光不正，并且呈逐年上升的趨勢(shì)，在亞洲部分國(guó)家和地區(qū)特定人群中尤為顯著，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。視網(wǎng)膜–視網(wǎng)膜色素上皮–脈絡(luò)膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)在近視發(fā)病機(jī)制中的作用成為眼科研究的熱點(diǎn)。
　　轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（Transforming Growth Factor-β，TGF-β)/Smad信號(hào)通路具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、遷移和侵襲轉(zhuǎn)移等多種功能，也是近視眼發(fā)病機(jī)制研究的重要信號(hào)通路之一。近期研究發(fā)現(xiàn) Smad核

2、轉(zhuǎn)錄共抑制因子(Ski-related Protein N，SnoN)在糖尿病腎病大鼠腎臟組織中可調(diào)節(jié)通路信號(hào)的傳遞，SnoN的表達(dá)水平在很大程度上影響 TGF-β的生物學(xué)效應(yīng)，是TGF-β/Smad信號(hào)通路中重要的細(xì)胞因子。目前，人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞上是否有SnoN蛋白的存在及其在TGF-β/Smad信號(hào)通路中的作用尚不清楚。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)了SnoN蛋白在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ARPE-19細(xì)胞中的表達(dá)，和人重組TGF-

3、β1（rh TGF-β1）作用下ARPE-19細(xì)胞內(nèi)SnoN含量的變化，探討核轉(zhuǎn)錄共抑制因子SnoN蛋白在ARPE-19細(xì)胞中表達(dá)水平及其在TGF-β/Smad通路中可能的作用。
　　方法：在ARPE-19細(xì)胞上，用免疫熒光法（Immunofluoresent Assay，IFA）檢測(cè)細(xì)胞中 SnoN蛋白的表達(dá)水平以及表達(dá)部位；用不同濃度 rh TGF-β1（0ng/ml，1ng/ml，2ng/ml，5ng/ml，10ng/ml，

4、20ng/ml）、相同時(shí)間點(diǎn)（2h）和相同濃度 rhTGF-β1（5ng/ml）、不同時(shí)間點(diǎn)（0min，30min，1h，2h，3h，6h，12h，24h，48h）干預(yù)ARPE-19細(xì)胞后，分別提取RNA和蛋白質(zhì)，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR法（Real-time Fluorescent Quantitation Polymerase Chain Reaction，F(xiàn)Q-PCR）檢測(cè)SnoN的mRNA表達(dá)水平的差異性；用蛋白免疫印跡（Weste

5、rn-Blot）法檢測(cè)SnoN蛋白表達(dá)水平的差異性。
　　結(jié)果：①免疫熒光結(jié)果顯示SnoN蛋白在ARPE-19細(xì)胞中有表達(dá)，且主要位于胞漿中；②不同濃度rhTGF-β1（0ng/ml，1ng/ml，2ng/ml，5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml）作用于ARPE-19細(xì)胞2h后，與空白對(duì)照組相比，各處理組SnoN的mRNA表達(dá)量水平顯著增高，明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。然而，SnoN蛋白表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.

6、05）；③在相同濃度rhTGF-β1（5ng/ml）、不同時(shí)間點(diǎn)（0min，30min，1h，2h，3h，6h，12h，24h，48h）作用于RPE細(xì)胞后，與空白對(duì)照組相比，30min組SnoNmRNA表達(dá)量下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其余各處理組 SnoNmRNA表達(dá)量均上升，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。然而，SnoN蛋白表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：SnoN蛋白在ARPE-19細(xì)胞中有