TGF-β-Smad信號(hào)通路在小鼠肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用及對FN、OPN表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　使用博萊霉素誘導(dǎo)C57BL/6小鼠肺纖維化，建立肺纖維化動(dòng)物模型，觀察TGF-β/Smad信號(hào)通路在小鼠肺纖維化中的作用以及對纖維連接蛋白（FN）、骨橋蛋白（OPN）表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討肺纖維化可能的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：
　　將健康雄性C57BL/6小鼠（20g±2g）72只，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為三組：對照（NS）組、模型（M）組、SB431542阻斷（SB）組，每組24只。造模第一日，M組和SB組采

2、用氣管內(nèi)滴注博萊霉素（BLM）稀釋液（按3.5mg/kg劑量稀釋，溶劑為0.9％氯化鈉注射液，總稀釋量為50μl）方法進(jìn)行小鼠肺纖維化模型的建立，NS組氣管內(nèi)滴入50ul的0.9%氯化鈉注射液；SB組小鼠分別于造模后第3、4、5天腹腔內(nèi)注射濃度為0.5g/L的SB431542（按4.2mg/Kg，溶于為10%乙醇中），共三次，其余2組于同時(shí)間點(diǎn)給予相等量的10%乙醇溶液。于造模后第7、14、28天隨機(jī)抽取各組中8只小鼠（共24只），經(jīng)腹

3、主動(dòng)脈放血法致死，取肺組織標(biāo)本。肺組織病理切片行HE、Masson染色，觀察評(píng)估小鼠肺泡炎反應(yīng)和纖維化改變情況；樣本堿水解法檢測肺組織中羥脯氨酸含量，進(jìn)一步評(píng)估肺纖維化的程度；免疫組化法測定肺組織中FN、OPN、p-Smad3蛋白的表達(dá)，各組進(jìn)行對比。
　　結(jié)果：
　　1.NS組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)基本正常，M組小鼠于第7天時(shí)肺泡炎癥明顯，第14天時(shí)開始纖維化改變，于第28天時(shí)肺炎癥減輕及纖維化改變顯著；SB組各時(shí)間點(diǎn)的小鼠肺泡炎

4、及纖維化程度均較M組明顯減輕。2.NS組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)HYP含量無明顯變化，其余兩組各時(shí)間點(diǎn)HYP含量隨著時(shí)間推移均升高，于第28天時(shí)達(dá)到高峰；M組和SB組第14、28天時(shí)HYP含量較NS組均升高（P<0.05），但SB組各時(shí)間點(diǎn)HYP含量較同期M組有所下降（P<0.05）。3.p-Smad3主要在小鼠肺組織的巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、肺泡及支氣管上皮細(xì)胞等胞漿中表達(dá)。FN主要于小鼠肺血管、支氣管周圍、肺泡間隔及增生的間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)。NS組

5、肺組織中有少量的p-Smad3、FN的陽性表達(dá)，M組在各時(shí)間點(diǎn)的p-Smad3、FN的表達(dá)均較NS組有所增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而p-Smad3于第28天時(shí)達(dá)到高峰，F(xiàn)N于第14天時(shí)達(dá)到高峰。OPN主要分布于氣管壁及血管壁平滑肌，肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)。與NS組相比，M組在各時(shí)間點(diǎn)的OPN的表達(dá)均有所增加（P<0.05），于第28天時(shí)增加最明顯。與M組比較，SB組各時(shí)間點(diǎn)的p-Smad3、FN、OPN的表達(dá)均明