心之病絡(luò)孫絡(luò)絀急的中醫(yī)微觀病理特征研究.pdf

1、目的：建立心之病絡(luò)孫絡(luò)絀急的大鼠模型,并通過研究不同觀察時間點內(nèi)大鼠整體、器官、組織、細胞以及分子水平的病理變化,以闡明“孫絡(luò)-微血管”病變之孫絡(luò)絀急的病理演變規(guī)律,為脈絡(luò)病變的臨床微觀辨證用藥提供理論依據(jù)。
　　方法：(1)選取雄性SD大鼠30只,隨機分為空白組,造模5 min組、造模10 min組、造模20 min組以及造模30 min組,每組6只。通過股靜脈注射pit的方法建立心之病絡(luò)孫絡(luò)絀急的病理模型。采用激光多普勒技術(shù)檢

2、測造模前后心肌表面血流量變化,隨后取心肌組織行分別Naga-Olsen染色、電鏡觀察各組大鼠心肌組織病理變化,并檢測各組心肌組織claudin-5、occludin蛋白表達。另取雄性SD大鼠6只,檢測造模前后心肌微血管通透性變化。(2)選取雄性SD大鼠30只,隨機分為空白組,造模5 min組、造模10 min組、造模20 min組以及造模30 min組,每組6只。造模后檢測血漿ET-1、NO、AngⅡ、TXB2以及6-Keto-PGF1

3、α濃度,并檢測各組心肌組織iNOS、eNOS、ET-1mRNA表達。(3)選取雄性SD大鼠30只,隨機分為空白組,造模5 min組、造模10 min組、造模20 min組以及造模30 min組每組6只,造模后采用TUNEL方法檢測各組大鼠心肌細胞凋亡指數(shù),并檢測各組微血管新生、凋亡相關(guān)蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1、與空白組比較,模型組大鼠心臟表面血流量在各時間點均有不同程度的減少(P<0.05或 P<0.01),并且隨著時

4、間的推移,血流量呈現(xiàn)出逐漸恢復(fù)的趨勢。Nagar-Olsen染色顯示,造模后10 min開始心肌組織可見大片紅染的陽性反應(yīng)區(qū)。缺血表現(xiàn)尤以模型10 min組和模型20 min組最為明顯。電鏡觀察顯示各模型組微血管內(nèi)皮細胞間緊密連接清晰致密,微血管內(nèi)皮細胞核不規(guī)則,染色質(zhì)不均勻、邊集,呈現(xiàn)明顯凋亡現(xiàn)象。模型各組吞飲小泡數(shù)量明顯增加。造模后10 min開始微血管通透性開始增加并持續(xù)至觀察時間結(jié)束。
　　2、與空白組比較,各模型組血漿E

5、T-1水平均顯著升高(P<0.01),且于5 min時達到高峰。血漿TXB2在造模5 min組顯著升高(P<0.01),而在30 min組時其水平明顯下降(P<0.05)。血漿6-keto-PGF1α水平在造模10 min后開始顯著下降(P<0.05或P<0.01),并在30 min時達到低峰(P<0.01)。TXB2/6-keto-PGF1α在造模后5 min至20 min顯著增高(P<0.01或P<0.05),并于5 min時達到高

6、峰,而在30 min時恢復(fù)至正常水平。AngⅡ水平在造模后5 min內(nèi)并無顯著變化,而在造模后10 min開始其水平顯著升高(P<0.05),并呈遞增趨勢,于30 min時達到高峰(P<0.01)。各模型下血清NO濃度表現(xiàn)為不同程度的升高?；虮磉_方面,iNOS mRNA表達在造模后5min組、10min組顯著上調(diào)(P<0.01),而在造模后30min組時其表達顯著下調(diào)(P<0.01),而eNOSmRNA在各時間點表達均明顯下降(P<0

7、.05),ET-1 mRNA在各組均有不同程度的升高。
　　3、空白組大鼠未見明顯陽性凋亡細胞,各模型組凋亡細胞數(shù)量明顯增加(P<0.05),并且隨缺血時間延長,凋亡細胞數(shù)量逐漸升高。與空白組比較,Bax蛋白表達在造模后20 min開始明顯升高(p<0.01)。各模型組bcl-2蛋白表達無明顯變化。p53方面,與空白組比較,模型組大鼠在前20 min內(nèi)無明顯變化,而在30 min時顯著增強(p<0.05)。與空白組比較,各模型組C

8、D34、VEGF、PDGF、Ang2蛋白表達均未有明顯變化(p>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.孫絡(luò)絀急病變急性期,心肌表面血流量即可明顯減少。
　　2.孫絡(luò)絀急病變急性期,心肌表面微血管通透性顯著升高,微血管內(nèi)皮細胞緊密連接結(jié)構(gòu)完整,緊密連接蛋白表達未見明顯升高,吞飲小泡數(shù)量顯著增加,提示孫絡(luò)絀急急性期微血管內(nèi)皮細胞可能通過吞飲小泡的大量釋放來使其通透性發(fā)生改變。
　　3.孫絡(luò)絀急病變急性期微血管內(nèi)皮細胞正常