煙草白星病的病原學及生防菌篩選.pdf

1、煙草白星病(Phyllosticta nicotianae Ell.et EV)又叫煙草斑點病，與煙草蛙眼病、黑斑病以及氣候斑點病極為相似，不易區(qū)分且易混生。煙草白星病的病原（Phyllostictanicotianae）一直以來被認為是葉點霉，而葉點霉和莖點霉屬于真菌中的半知菌亞門、腔孢綱、球殼孢目的兩個屬。二者形態(tài)差異很小，分屬界定標準較模糊，種類鑒定較困難。兩屬的傳統(tǒng)分類依據主要是以寄生部位進行劃分，寄生在葉片上的為葉點霉（Phy

2、llosticta）、寄生在葉以外的為莖點霉（Phoma），但實際鑒定中，常遇到同一種Phyllosticta或Phoma既寄生在葉片上又寄生在莖、果實等其它部位的情況，因此很難斷定該病菌是屬于Phyllosticta還是Phoma，對此，前人也鮮有研究報道。本文采用傳統(tǒng)的真菌形態(tài)學鑒定法及分子生物學鑒定法，對采自6個煙草主產區(qū)的病樣進行了病原菌分離鑒定，以及病原菌的生物學特性研究和拮抗菌的篩選。旨為查明煙草白星病病原菌的分類地位，為煙

3、草白星病的防治提供理論依據。研究結果如下:
　　(1)煙草白星病病原菌的分離與鑒定:采用對染病葉片單斑進行分離、純化，對分離菌株致病性測定、形態(tài)學鑒定及分子生物學鑒定等研究法，對采自于遼寧、黑龍江、廣西等6個煙草主產區(qū)的具有煙草白星病癥狀的病樣進行了病原菌分離鑒定。依據形態(tài)學鑒定法從300多個樣品中共分離出31株疑似菌株。通過分子生物學鑒定結果表明，菌株間的its序列差異較小、相似度較高;NCBI比對聚類分析表明，5株是莖點霉屬(

4、Phoma.sp)、2組為擬莖點霉屬(Phomasis.sp)，1組為葉點霉(Phyllosticta.sp)，都屬于未定種，進而通過β-tubulin測定的結果為5株是莖點霉屬(Phoma)，分離菌致病性測定結果表明他們均具有致病性。
　　(2)病原菌的生物學特性研究:煙草白星病病原菌適宜的培養(yǎng)基是OA和PDA;最適pH值為5.0-7.0;溫度為4-35℃的范圍內均可生長，25℃左右產孢量最多、孢子萌發(fā)率最大，當溫度為40℃不再

5、產孢;光照對病原菌直徑大小影響不大，但光暗交替利于產孢。
　　(3)拮抗菌的篩選及抑菌效果:從煙草根際土壤中分離純化得到20株真菌和14株細菌，其中有9株真菌和1株細菌對煙草白星病病菌具有明顯的抑菌作用。采用五點對峙法，以9株真菌、1株細菌和5種農藥（甲基托布津、多菌靈、多菌清、百菌清和惡霉靈）對煙草白星病病原菌進行了抑菌活性檢測，結果表明:真菌M7、M8、M9以及有效濃度為25 mg/μl的多菌清具有較好的抑菌效果，他們可使病原