胃癌組織中Bcl-2 NF-κB的表達(dá)及其臨床價(jià)值.pdf

1、背景與目的: 胃癌是嚴(yán)重威害人類健康的最常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居所有惡性腫瘤的第四位，是癌癥死亡原因的第二位。長期以來包括手術(shù)切除及其他綜合性治療的應(yīng)用，并沒有帶來滿意的生存率，胃癌至今仍是全球人口主要癌癥死亡，在中國與其他東南亞尤其重要。 隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的研究為腫瘤的藥物治療提供了一種新的模式：分子靶向治療(molecular targeting therapy)，靶向治療制劑的高效低毒特性越來越引起臨床醫(yī)

2、師大的重視，目前分子靶向藥物的發(fā)展，大多集中在與細(xì)胞生長、分化以及各種細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制的信號(hào)傳導(dǎo)路徑，這些信號(hào)傳導(dǎo)路徑是通過細(xì)胞分子因子的活化來調(diào)控。研究表明Bcl—2 NF—κB與腫瘤的形成、分期、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及療效密切相關(guān)，同時(shí)他們在分子靶向治療中發(fā)揮重要作用。 國內(nèi)外尚無對Bcl—2，NF—κB于胃癌中的表達(dá)及其相關(guān)性的聯(lián)合研究，本研究制作胃癌組織芯片，應(yīng)用免疫組化的方法，檢測兩種蛋白在胃癌中的表達(dá)情況，分析其與胃癌臨床病理

3、特征的關(guān)系，以及兩者之間的相互聯(lián)系，旨在探討B(tài)cl—2，NF—κB在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。 材料與方法: 1、研究對象 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院及遼寧省腫瘤醫(yī)院2005年10月～2006年8月手術(shù)切除的胃癌組織標(biāo)本124例。其中男性92例，女性32例。年齡24—85歲，中位年齡60歲。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療。病理均為腺癌，高分化(乳頭狀腺癌，高分化管狀腺癌)11例，中分化(中分化管狀腺癌)29

4、例，低分化(低分化腺癌，印戒細(xì)胞癌，粘液腺癌)84例。組織分期采用1997年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)制定的TNM臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，癌組織浸潤深度劃分如下：T1粘膜層或粘膜下層，T2肌層或漿膜下，T3穿透漿膜，T4侵犯臨近結(jié)構(gòu)；其中T1為3例，T2為73，T3為40例，T4為8例；未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移100例；發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者5例，未發(fā)生者119例；Ⅰ期17例，Ⅱ期46例，Ⅲ期37例，N期24例。 2、儀器 光

5、學(xué)顯微鏡、恒溫箱、切片架、標(biāo)本缸、濕盒、加樣器。 3、試劑 鼠抗人Bcl—2單克隆抗體(工作濃度為即用型)購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；鼠抗人NF—KB單克隆抗體(工作濃度為1:100)購自SANTA CRUZ公司；SP試劑盒及DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。 4、實(shí)驗(yàn)方法 將124例胃癌標(biāo)本制作成組織芯片，技術(shù)由上海芯超生物科技有限公司提供，采用免疫組化S-P法，按照S-P檢測試劑盒

6、說明書所示步驟進(jìn)行。 5、結(jié)果判斷 Bcl—2，NF—κB均以胞膜和/或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，于顯微鏡400倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)有代表性的不同區(qū)域，每個(gè)視野的得分由陽性細(xì)胞的比例和顯色強(qiáng)度兩方面決定，結(jié)果判定采用雙盲法，由2位病理科醫(yī)師對染色結(jié)果復(fù)閱核定。依照陽性細(xì)胞比例：<10％，10％—25％，25％—50％、>50％分別得0分、1分、2分、3分；依照顯色強(qiáng)度：未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別得0分、1分

7、、2分、3分；將兩項(xiàng)得分相乘得到該視野的最終得分，選取的5個(gè)視野得分的平均值為最后得分。最后該切片按照得分分為以下四個(gè)等級：0-1分為(-)，2—4分為(+)，>5分為(++)。(-)為陰性，(+)為弱陽性表達(dá)，(++)為陽性表達(dá)。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均應(yīng)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行，采用X2檢驗(yàn)、校正X2檢驗(yàn)及Spearman等級相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、Bc

8、l—2，NF—κB在胃癌組織中的表達(dá) Bcl—2，NF—κB在124例胃癌組織中陽性表達(dá)率分別為54.0％(67/124)，83.1％(103/124)。 2、胃癌組織中Bcl—2蛋白和NF—KB蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性 研究發(fā)現(xiàn)，兩種蛋白的表達(dá)強(qiáng)度之間存在一定的相關(guān)性。采用Spearman等級相關(guān)檢驗(yàn)方法顯示，NF—KB和Bcl—2的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)及P值為r=0.260，P=0.004(見表3)。Bc

9、l—2，NF—KB的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系在胃癌中，Bcl—2的表達(dá)與分化程度的Spearman的相關(guān)系數(shù)為-0.219(P=0.042)，這說明Bcl—2的表達(dá)與分化程度呈負(fù)相關(guān)，但與浸潤深度、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等其他臨床病理因素?zé)o顯著相關(guān)性(P>0.05)。NF—KB蛋白表達(dá)與病理分期、分化程度有關(guān)，而與性別、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)在胃癌中，NF—KB表達(dá)與分化程度、病理分期的Spearman的相關(guān)

10、系數(shù)分別為-0.250(P=0.016)，0.235(P=0.008)，這說明NF—KB的表達(dá)與病理分期呈正相關(guān)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)，但與性別、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等其他臨床病理因素?zé)o顯著相關(guān)性(P>0.05)。 3、胃癌組織中Bcl—2蛋白和NF—KB蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性 研究發(fā)現(xiàn)，兩種蛋白的表達(dá)強(qiáng)度之間存在一定的相關(guān)性。采用Spearman等級相關(guān)檢驗(yàn)方法顯示，NF—KB和Bcl—2的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)，相關(guān)