胃癌中NF-κB的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、本文研究目的：建立KIR基因及其等位基因分型方法，了解KIR基因及其等位基因在浙江漢族人群中的分布。 研究方法： ①采用KIR基因PCR-SSP分型試劑盒對(duì)104例浙江漢族人群進(jìn)行KIR基因檢測(cè)，初步了解KIR基因在浙江漢族人群中的分布。 ②設(shè)計(jì)合成19對(duì)引物，建立短片段KIR基因PCR-SSP分型方法，并檢測(cè)了200例浙江漢族樣本。 ③設(shè)計(jì)合成兩對(duì)擴(kuò)增引物和21條核苷酸探針，建立KIR3DL2等位基因P

2、CR-SSOP分型方法，并檢測(cè)了104例浙江漢族樣本。 ④設(shè)計(jì)合成3對(duì)擴(kuò)增引物和13條核苷酸探針，建立KIR2DL3等位基因PCR-SSOP分型方法，并檢測(cè)96例浙江漢族樣本。 ⑤設(shè)計(jì)合成兩對(duì)擴(kuò)增引物和4條測(cè)序引物，建立KIR2DL4等位基因PCR-SBT分型方法，并檢測(cè)83例浙江漢族樣本。 ⑥設(shè)計(jì)合成一對(duì)擴(kuò)增引物和兩條測(cè)序引物，建立KIR2DS4等位基因PCR-SBT分型方法，并檢測(cè)105例浙江漢族樣本。

3、 研究結(jié)果： ①經(jīng)KIR基因PCR-SSP分型試劑盒檢測(cè)，在浙江漢族人群中檢出所有目前已知的17個(gè)KIR基因，其中2DL4、3DL2、3DL3和3DP1基因存在于所有個(gè)體。2DL1、2DL3、2DP1、3DP1*003、3DL1和2DS4*001/002基因較為常見(jiàn)，頻率分別為0.9、0.9、0.9、0.76和0.56；而2DL2、2DL5A、2DL5B、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4*003、2DS5、3DS1和3D

4、P1*001/002基因頻率較低。浙江漢族人群中共發(fā)現(xiàn)26種基因型，其中以AJ(2，2)和AF(1，2)型最為常見(jiàn)，頻率分別為30.8％和25％。有15種基因型在白人中尚未見(jiàn)報(bào)道，但頻率較低，尚有5種無(wú)法根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)分析出單倍體。在可以分析出單倍體的99例樣本(共198條單倍體)中，共檢測(cè)出12種單倍體，最常見(jiàn)的是單倍體2，占54.6％，其次是單倍體1，占20.7％。 ②實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的KIR基因短片段PCR-SSP分型方法準(zhǔn)確可靠

5、，所選取的包括所有基因型的110例樣本與Dynal公司KIR基因PCR-SSP分型試劑盒分型結(jié)果完全一致。浙江漢族人群中發(fā)現(xiàn)的基因型已增加到35種，白人中未見(jiàn)報(bào)道的基因型增加到21種，但頻率相對(duì)較低，無(wú)法根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)分析出單體型的基因型增加到7種，其中基因型NN16共發(fā)現(xiàn)3例。 ③實(shí)驗(yàn)建立的KIR3DL2等位基因PCR-SSOP分型方法準(zhǔn)確可靠，所檢測(cè)的104例浙江漢族樣本中共檢測(cè)到18種等位基因組合，確認(rèn)8種KIR3DL2等位

6、基因，其中KIR3DL2*002頻率高達(dá)0.558，其次是KKI3DL2*010和KIR3DL2*007，分別為0.135和0.13；實(shí)驗(yàn)還確認(rèn)了一種新KIR3DL2等位基因KIR3DL2*015。 ④實(shí)驗(yàn)建立的KIR2DL3等位基因PCR-SSOP分型方法準(zhǔn)確可靠，所檢測(cè)的96例浙江漢族樣本中95例為KIR2DL3基因陽(yáng)性，KIR2DL3基因頻率為0.9。共檢測(cè)到兩種KIR2DL3等位基因，分別為2DL3*001和2DL3*0

7、02，2DL3*001頻率高達(dá)78％，2DL3*002頻率為12％。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)1例樣本檢測(cè)出兩個(gè)2DL3等位基因的同時(shí)，還檢測(cè)到2DL2基因。 ⑤實(shí)驗(yàn)建立的KIR2DL4等位基因PCR-SBT分型方法準(zhǔn)確可靠，所檢測(cè)的83例浙江漢族樣本中共檢測(cè)到21種基因型，確認(rèn)7種KIR2DL4等位基因，分別為2DL4*00102、2DL4*00103、2DL4*00202、2DL4*005、2DL4*006、2DL4*0080101/03

8、和2DL4*011，其中2DL4*00102頻率高達(dá)52％。在83例漢族人群中發(fā)現(xiàn)5例樣本為KIR3DP1*004等位基因陽(yáng)性，其頻率為0.03。其中兩例樣本明確含有三個(gè)KIR2DL4等位基因，分別為2DL4*00102、2DL4*00103、2DL4*006和2DL4*00103、2DL4*005、2DL4*006。 ⑥實(shí)驗(yàn)建立了KIR2DS4等位基因PCR-SBT分型方法準(zhǔn)確可靠，所檢測(cè)的105例浙江漢族樣本根據(jù)等位基因多態(tài)

9、性格局，共區(qū)分出4種KIR2DS4等位基因，分別為2DS4*00101、2DS4*003、2DS4*004和2DL4*007。結(jié)合KIR單倍體檢測(cè)結(jié)果，共確認(rèn)11種基因型。所有樣本中，6例為2DS4基因陰性，23例只包含1個(gè)2DS4基因。KIR2DS4*00101等位基因頻率最高，為0.576，其次為KIR2DS4*007，頻率為0.114。 研究結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)闡明了KIR基因和KIR單倍體在浙江漢族人群中的分布，建立了KIR3D