人鼠嵌合抗腫瘤細胞核單抗-空間穩(wěn)定脂質體研究.pdf

1、該文首先從普通和穩(wěn)定性脂質體膜材料制備出發(fā),制備了蛋白黃卵磷脂(EPC)、氫化卵磷脂(HEPC)、甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺或氫化磷脂酰乙醇胺(MPEG-EPE或MPEG-HEPE)以及抗體與脂質體的橋連劑—吡啶二硫丙?；?聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺或氫化磷脂酰乙醇胺(PDP-PEG-EPE或PDP-PEG-HEPE)及其中間體單氨基聚乙二醇(PEG-NH<,2>).TLC、IR、HNMR證實所制備的膜材料均符合實驗要求.空間穩(wěn)定免疫脂質

2、體(chTNT-SLs或IgG-SLs)的制備是采用高壓乳勻法先制備出含PDP-PEG-EPE的空間穩(wěn)定脂質體(PDP-SLs),再通過二硫蘇糖醇(DTT)將其還原來表面帶巰基的SLs(HS-SLs),最后與衍生化后的抗體連接即得,其粒徑分布均勻,平均粒徑約為140nm,稍大于修飾前粒徑.包載阿霉素(DOX)則在制得PDP-SLs后進行,繼后再連接抗體.采用硫酸胺梯度法包載DOX時,膜組成為EPC/Chol/MPEG-EPE或再加PDP

3、-PEG-EPE的脂質體,包載條件以50℃、30min為優(yōu);膜組成為HEPC/Chol/MPEG-HEPE或再加PDP-PEG-HEPE的脂質體,包載條件65℃、30min為優(yōu),且藥脂比為1:5時,包封率可達95﹪以上.空間穩(wěn)定免疫脂質體的免疫活性是決定其能否主動靶向的關鍵.<'125>I標記法的檢測結果表明:抗體連接效率為53.72﹪,脂質體表面抗體密度為75.23μg Ab/μmol磷脂,處于較優(yōu)的抗體密度范圍內;chTNT和chT

4、NT-SLs與Raji細胞的特異性結合率均約為5﹪,與其核抗原結合率約15﹪;chTNT、chTNT-SLs均能與<'125>I-chTNT競爭結合Raji細胞核抗原,提示二者均有相同的免疫結合位點.空間穩(wěn)定免疫脂質體的粒徑及所包載DOX的膜泄漏穩(wěn)定性決定著其在體內的生物學行為,在血循環(huán)中滯留時間長短是決定其能否靶向實體瘤組織的關鍵.放置過程中粒徑變化結果提示,空間穩(wěn)定免疫脂質體的穩(wěn)定性介于普通脂質體和空間穩(wěn)定脂質體之間;DOX-SL-

5、IgG在37℃的PBS和1﹪人血漿中振蕩放置10h藥物泄漏或釋放率分別為20.7﹪和9.5﹪,提示DOX空間穩(wěn)定免疫脂質體膜阻止DOX泄漏性能較好;<'125>I標記chTNT-CLs和chTNT-SLs在大鼠體內藥動學檢測結果表明,后者在血液中清除慢,滯留時間比前者長.HPLC-熒光檢測法測定DOX-SLs、DOX-SL-IgG和DOX在大鼠體內藥動學的結果表明,藥動學行為均符合兩室模型,但DOX脂質體的t<,1/2>均比DOX長得多

6、,提示DOX空間穩(wěn)定免疫脂質體具有血液長循環(huán)特性.空間穩(wěn)定免疫脂質體在實體瘤組織積聚程度是其能否發(fā)揮療效的基礎,影像學定位是了解其在靶位動態(tài)積聚程度和速度的一種較為直觀的方法.將磁共振用順磁性顯像劑的主藥成分釓噴酸復合物(Gd-DTPA)包載于脂質體中,制備成Gd-SL-chTNT.通過對給藥后不同時相點的荷SKOV3瘤裸鼠進行磁共振增強掃描,結果表明,Gd-SL-chTNT在瘤體部位強化特征不同于游離Gd-DTPA,表面為12h和24