PARP-1及其相關(guān)因子在低劑量甲醛誘導(dǎo)的毒物興奮效應(yīng)及適應(yīng)性反應(yīng)中的表達(dá)改變.pdf

1、　 本研究以甲醛為研究對(duì)象，MTT法建立適應(yīng)性反應(yīng)模型并用流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證后，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)不同劑量毒物刺激及適應(yīng)性反應(yīng)過(guò)程中PARP-1與其相關(guān)因子DNA-PK、ATM、P53、NF-кB的表達(dá)改變，驗(yàn)證PARP-1被低劑量毒物激活，促進(jìn)斷裂DNA的修復(fù)，從而使細(xì)胞對(duì)繼后大劑量毒物攻擊產(chǎn)生耐受的機(jī)制，初步探討PARP-1與其相關(guān)因子在適應(yīng)性反應(yīng)過(guò)程中的可能聯(lián)系，為研究PARP-1在低劑量ECPs接觸時(shí)參與應(yīng)激/適應(yīng)過(guò)程的細(xì)

2、胞與分子機(jī)制提供理論依據(jù)。 材料和方法:1.MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖功能，建立適應(yīng)模型，確定實(shí)驗(yàn)分組：采用噻唑藍(lán)顏色反應(yīng)法(MTT法)略為改進(jìn)。做出甲醛誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5毒性的劑量-反應(yīng)關(guān)系曲線，選用無(wú)毒性濃度作為預(yù)處理劑量(D1)，IC50左右的濃度作為攻擊劑量(D2)，建立低劑量甲醛誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞產(chǎn)生的適應(yīng)性反應(yīng)模型。另外，在低劑量甲醛預(yù)處理后加入PARP-1抑制劑PJ34(5μM)，看其是否抑制MRC-5細(xì)胞對(duì)

3、高劑量甲醛致DNA斷裂的適應(yīng)現(xiàn)象。最后確定實(shí)驗(yàn)分組為：對(duì)照組、D1組、D2組、D1+D2組、D1+PJ34組、D1+PJ34+D2組。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，同時(shí)驗(yàn)證所建立的適應(yīng)模型：培養(yǎng)MRC-5至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，按所建立的適應(yīng)模型分組處理后，2.5mg/L胰蛋白酶消化收集各組細(xì)胞，用AnnexinVFITC/PI復(fù)染，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞變化情況，驗(yàn)證MTT法所建立的適應(yīng)模型。3.RealtimeRT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中PARP-1