PKCθ在再生障礙性貧血患者外周血單個核細胞中的表達及意義.pdf

1、目的：
　　 分析蛋白激酶Cθ(PKCO)及Th1/Th2，Tc1/Tc2類細胞因子在再生障礙性貧血(再障，AA)患者外周血單個核細胞(PBMC)中的表達水平；研究抑制AA患者PKCθ后對Th1/Th2和Tc1/Tc2細胞的影響，探討PKCθ在AA發(fā)病機制中的作用。
　　 方法：
　　 1、收集23例再障患者外周血,35例正常人外周血，分離PBMC，采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)方法檢測PBMC中PKC

2、θmRNA表達水平；流式細胞術(shù)分析PBMC中Th1/Th2和Tc1/Tc2類細胞因子表達情況。
　　 2、分離再障患者PBMC，加入PKCθ抑制劑Rottlerin(10μmol/L)培養(yǎng)6小時，收獲細胞，RT-qPCR檢測抑制后PKCθmRNA表達；流式細胞術(shù)分析Th1/Th2和Tc1/Tc2類細胞因子的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、再障患者PBMC中PKCθmRNA相對表達量升高（AA組vs正常組=23.5

3、4+1.01vs27.12±1.12，P=0.003），Th1、Tc1類細胞因子表達水平較正常對照組顯著升高（AA組vs正常組，Th1類細胞因子，CD4+IFN-γ：15.26±2.30vs8.20±1.35;CD4+IL-2：16.15±2.00vs8.24±1.10;CD4+TNF-α：12.78±2.50vs4.90±1.02;Tc1類細胞因子，CD8+IFN-γ：15.37±1.91vs8.03±1.23;CD8±IL-2:4.

4、15±0.82vs1.79±0.34;CD8+TNF-α:8.70±1.21vs2.26±0.41.P值均＜0.05）。Th2、Tc2類細胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)表達水平較正常對照組無明顯變化(P值均＞0.05)。
　　 2、加入Rottlerin培養(yǎng)后，再障患者PBMC中PKCθmRNA相對表達量明顯下降（抑制前組vs抑制后組=23.54±1.01vs25.41±0.98，P=0.014）；Th1、Tc1類細胞

5、因子表達水平較抑制前明顯下降，（抑制前組vs抑制后組，Th1類細胞因子，CD4+IFN-γ:15.26±2.30vs7.06±1.12;CD4+IL-2:16.15±2.00vs7.08±1.83;CD4+TNF-α:12.78±2.50vs6.23±0.91;Tc1類細胞因子，CD8+IFN-γ:15.37±1.91vs5.87±0.56;CD8+IL-2:4.15±0.82vs1.76±0.37;CD8+TNF-α:8.70±1.2

6、1vs3.93±0.80.P值均＜0.05）。Th2、Tc2類細胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)表達水平較抑制前無明顯變化，無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、AA患者PBMC中PKCθmRNA和Th1、Tc1類細胞因子表達均增高，AA患者存在Th1、Tc1細胞免疫異常。
　　 2、抑制AA患者PKCθ表達后，Th1、Tc1類相關(guān)細胞因子分泌明顯受抑，提示PKCθ可能是調(diào)節(jié)AA患者