萘哌地爾衍生物YMⅢ擴(kuò)張血管與抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖作用及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：1本實(shí)驗(yàn)旨在觀(guān)察萘哌地爾衍生物YMⅢ對(duì)家兔血管活動(dòng)的影響，并就其血管活性進(jìn)行機(jī)理探討；2研究YMⅢ對(duì)體外培養(yǎng)的自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)及Wistar大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖的影響，并在DNA合成、細(xì)胞周期、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化及AGT、c-myc基因表達(dá)等層面進(jìn)行機(jī)理分析，為該藥的開(kāi)發(fā)研究提供基礎(chǔ)資料。 方法：1(1)采用家兔主動(dòng)脈等張收縮的方法，觀(guān)察YMⅢ對(duì)去甲腎上腺素(NA)、5-羥色胺(5-HT)、和高

2、鉀量效曲線(xiàn)的影響；(2)應(yīng)用無(wú)Ca2+-復(fù)Ca2+的實(shí)驗(yàn)方法，以NA和咖啡因?yàn)檠苁湛s劑，間接觀(guān)察YMⅢ對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度([Ca2+]i)的影響并分析其可能作用的鈣通道；(3)采用鈣熒光指示劑Fura-2/AM負(fù)載的培養(yǎng)家兔胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，直接觀(guān)察該藥對(duì)NA和高鉀所致([Ca2+]i)升高的影響。2(1)將SHR及Wistar大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，以SHR胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為研究對(duì)象，Wistar大鼠作對(duì)照。(2)應(yīng)

3、用四甲基偶氮唑鹽(MTT)微量酶反應(yīng)法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；氚-胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]-TdR)摻入量觀(guān)察DNA合成的影響；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期；電鏡技術(shù)觀(guān)察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)AGT、c-myc基因表達(dá)，并觀(guān)察YMⅢ對(duì)上述各指標(biāo)的影響。 結(jié)果：1(1)YMⅢ(10-8、5×10-8、10-7mol·L-1)使NA量效曲線(xiàn)明顯平行右移，最大反應(yīng)不變，pA2值為8.00；本品10-6、5×10-

4、6mol·L-1，對(duì)氯化鉀(KCI)量效曲線(xiàn)沒(méi)有明顯影響，但當(dāng)濃度為10-5mol·L-1時(shí)，能使高鉀量效曲線(xiàn)呈非平行右移，最大反應(yīng)壓低，pD’2值為4.26。本品10-7、10-6、10-5mol·L-1雖使5-HT量效曲線(xiàn)的最大反應(yīng)有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)在無(wú)鈣Krebs液中，YMⅢ10-8、5×10-8、10-7mol·L-1呈濃度依賴(lài)性抑制NA所致血管條的短暫收縮，對(duì)復(fù)鈣后NA所誘發(fā)的持續(xù)收縮也呈濃度依賴(lài)性抑制作用，但

5、其劑量達(dá)10-5mol·L-時(shí)尚不能抑制咖啡因在無(wú)Ca2+液中所致收縮。在Fura-2/AM負(fù)載血管平滑肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，靜息時(shí)各濃度的YMⅢ對(duì)[Ca2+]i無(wú)明顯影響，但其對(duì)NA所引起的血管平滑肌[Ca2+]i增加有明顯的抑制作用，當(dāng)其劑量達(dá)10-5mol·L-1時(shí)對(duì)高鉀所致血管平滑肌[Ca2+]i增加同樣呈明顯的抑制。2(1)YMⅢ(10-7mol·L-1)作用24和48小時(shí)能抑制SHR和Wistar大鼠VSMC的基礎(chǔ)增殖活性(2)經(jīng)

6、AngⅡ10-6mol·L-1作用24小時(shí)SHR和Wistar大鼠VSMC的增殖活性、[3H]-TdR摻入以及AGT、c-mycmRNA表達(dá)水平均明顯高于相應(yīng)的對(duì)照組(3)YMⅢ(10-8、5×10-8、10-7mol·L-1)作用24小時(shí)能呈劑量依賴(lài)性抑制AngⅡ所致SHRVSMC增殖活性增加、DNA合成增多，使G0/G1期細(xì)胞比值增高，并使細(xì)胞停滯于G0/G1期；還能改善AngⅡ引起的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變并使Agt、c-mycmRNA

7、表達(dá)水平下調(diào)。 結(jié)論：1(1)YMⅢ可能是一種α受體阻斷劑。(2)YMⅢ擴(kuò)血管的機(jī)理可能是：①阻斷細(xì)胞膜上的α受體，從而抑制這些受體中介的鈣內(nèi)流；②阻斷細(xì)胞膜上的α受體，減少三磷酸肌醇(IP3)的生成，從而抑制細(xì)胞內(nèi)Ca2+的釋放；③高濃度可能抑制電壓依賴(lài)性Ca2+通道結(jié)果使血管平滑肌[Ca2+]i降低，血管擴(kuò)張。2(1)YMⅢ對(duì)VSMC增殖具有較強(qiáng)的抑制作用。(2)YMⅢ抗增殖的機(jī)理可能與其抑制原癌基因c-myc、AGTmRN