白藜三醇抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的: 本研究旨在細(xì)胞和分子水平來研究植物雌激素白藜三醇(RV)對大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)控機(jī)制，探討雌激素受體（ER）在RV抗動脈粥樣硬化中的重要作用，為今后RV作為血管增殖性疾病新的靶向治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 （1）用改良的植塊貼壁法體外培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)，在倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察并對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行SM-α actin免疫組化鑒定。
　　 （2）尋找RV對ER

2、K發(fā)揮作用的時(shí)間點(diǎn)：培養(yǎng)大鼠VSMCs并用50μmol/l的RV分別干預(yù)0、10、15、20、30、60min，用western blot 檢測各干預(yù)組VSMCs中ERK，P-ERK的表達(dá)水平。
　　 （3）觀察ER對RV作用的影響：培養(yǎng)大鼠VSMCs，將其分為正常對照組（C組），白藜三醇干預(yù)組（RV組），白藜三醇和ICI182780共同干預(yù)組（RV+ICI182780組）按分組用50μmol/l的RV及1μmom/LICI18

3、2780干預(yù)20min，用western blot 檢測各干預(yù)組VSMCs中ERK, P-ERK及NF-ΚB的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 （1）原代培養(yǎng)的VSMCs生長良好，光鏡下呈長梭形及“峰與谷”樣生長。SMα-actin免疫組化的結(jié)果顯示培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的VSMC特征。
　　 （2）RV干預(yù)不同時(shí)間各組ERK及P-ERK蛋白的表達(dá)情況：不同時(shí)間點(diǎn)各組ERK蛋白的表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。RV干

4、預(yù)10，15，20min組P-ERK蛋白較干預(yù)0min組的表達(dá)明顯增加（P＜0.05），RV干預(yù)30，60min組較干預(yù)0min組的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 （3）雌激素受體拮抗劑ICI18270對正常對照組（C組），白藜三醇干預(yù)組（RV組），白藜三醇和ICI182780共同干預(yù)組（RV+ICI182780組）ERK、P-ERK及NF-κB蛋白表達(dá)的影響：在C組、RV組和RV+ICI182780組ERK蛋白表

5、達(dá)差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。P-ERK蛋白的表達(dá)在RV組較C組明顯增加（P＜0.05），P-ERK在RV+ICI182780組的表達(dá)較RV組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。NF-κB蛋白在RV組的表達(dá)較C組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在RV+ICI182780組的表達(dá)較RV組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論: 白藜三醇可快速激活培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞ERK信號通路，促進(jìn)E