血管增殖抑制基因在原發(fā)性高血壓患者血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、[研究背景] 據(jù)WHO 2003年最新統(tǒng)計(jì)由于高血壓所造成的死亡占總死亡人數(shù)的18％，每年有710萬(wàn)人死于與高血壓相關(guān)的疾病，而且62％的中風(fēng)與49％的心血管疾病與高血壓相關(guān)。據(jù)估計(jì)目前中國(guó)有近2億患者。其患病率1959年為5. 11 ％，1979～1980年為7. 73％，1991年為11. 88 ％ ，1959～1979年的20年間，我國(guó)高血壓患病人數(shù)平均每年增長(zhǎng)140萬(wàn)，而1980～1991年的12年間，我國(guó)人群高血壓患病

2、率上升了4.15個(gè)百分點(diǎn)，絕對(duì)值增長(zhǎng)了54％,平均每年增長(zhǎng)320萬(wàn)，并有繼續(xù)上升趨勢(shì)。這種疾患對(duì)人民的健康已經(jīng)造成了極大的影響。 經(jīng)過(guò)科研工作者的不斷努力，尤其是隨著HGP計(jì)劃的順利進(jìn)行及人類基因組草圖的發(fā)布，人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到無(wú)論是繼發(fā)性高血壓還是原來(lái)認(rèn)為無(wú)明確原因可查的原發(fā)性高血壓，它們都在分子水平存在影響高血壓發(fā)生的重要基因-易感基因。由于疾病發(fā)生中，外因——環(huán)境因素，總是通過(guò)機(jī)體的內(nèi)因，即易感基因等起作用，所以，如何從分子水

3、平明確這些“內(nèi)因”，對(duì)于高血壓的診斷和治療具有非常重要的意義。對(duì)血管增殖抑制基因的研究也正是在這種背景下應(yīng)運(yùn)而生。 [目的] 血壓是受多種因素決定和調(diào)控的，其中有功能的因素如血管平滑肌緊張性增強(qiáng)；結(jié)構(gòu)的因素如細(xì)胞增殖、管壁增厚和管腔狹窄；以及調(diào)節(jié)的因素如神經(jīng)、體液和信息傳遞等。這些平衡失調(diào)的變化不但是持續(xù)的、長(zhǎng)期的，而且是漸進(jìn)的，并進(jìn)而導(dǎo)致高血壓的發(fā)生、發(fā)展和并發(fā)癥的出現(xiàn)。初步研究發(fā)現(xiàn)在高血壓動(dòng)物中，血管增殖抑制基因(H

4、yperplasia Suppressor Gene,HSG)的表達(dá)降低，而在正常血壓動(dòng)物中，該基因的表達(dá)正常。因而這種基因是可能是導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞(Vascular Smooth Muscle Cells ,VSMCs)增生的主要原因。那么原發(fā)性高血壓和非高血壓冠心病搭橋患者在細(xì)胞水平以及分子水平上會(huì)具有什么樣的差別？帶著這樣的問(wèn)題，我們開始了進(jìn)一步研究，以期得到分子水平上的證據(jù)，從而為高血壓的診斷、治療以及預(yù)防提供參考。

5、[方法] 本研究按照2005年中國(guó)高血壓防治指南原發(fā)性高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取冠心病行冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)的患者54例為研究對(duì)象，分為高血壓搭橋組(n=28)和正常血壓搭橋組(n=26)，盡量在病人入組時(shí)排除一切干擾研究分析的因素。術(shù)前留取兩組患者靜脈血，按照試劑盒要求采血，抗凝，用美國(guó)Dimension RL生化分析儀測(cè)定血液生化指標(biāo)，用放射免疫測(cè)定法測(cè)定內(nèi)皮素（Endothelin,ET）和腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（Reni

6、n-Angiotensin-Aldosterone system，RAAS）部分血管活性多肽：血漿腎素活性（Plasma Renin Activity，PRA）、血管緊張素I（Angiotensin I，Ang I）、血管緊張素II（Angiotensin II，Ang II）和醛固酮（Aldosterone，ALD）。術(shù)中留取新鮮橋血管，一部分做VSMCs培養(yǎng)，一部分放置液氮中凍存。用Trizol一步法提取白細(xì)胞，組織和細(xì)胞總RNA，

7、Promega公司試劑盒反轉(zhuǎn)錄（Reverse Transcription，RT），應(yīng)用Blast程序及Premier Primer 5.0軟件對(duì)序列進(jìn)行檢索、同源性分析，設(shè)計(jì)HSG引物，在適當(dāng)條件下行半定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)，之后進(jìn)行測(cè)序，觀察兩組患者HSG的表達(dá)情況。 [結(jié)果] 1．對(duì)兩組患者的常規(guī)生化指標(biāo)、血壓等進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常血壓搭橋組和高血壓搭橋組的最大差別在于血壓（P<0.01），其次是BMI（P<0.01

8、），其它指標(biāo)的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組患者的TG均值均高于正常值。對(duì)兩組人群血液學(xué)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析表明：BMI與GLU、BMI與SBP、BMI與DBP、CK-MB與LDH、LDH與AST、ALT與AST、ALT與DBP、AST與DBP、GLU與TG、CHO與HDL、CHO與LDL、SBP與DBP、ALD與CHO、ALD與LDL之間存在著明顯的相關(guān)，其它指標(biāo)之間無(wú)明顯相關(guān)2．PRA、Ang I、Ang II、ALD和ET五種血管活性

9、多肽均存在高血壓搭橋組患者高于正常血壓搭橋組患者的趨勢(shì)，雖然這種差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)兩組人群五種血管活性肽進(jìn)行相關(guān)性分析表明，只有PRA與Ang I之間存在著明顯的相關(guān)性（P<0.01）。而其它因子之間不存在明顯的相關(guān)性。 3．采用半定量PCR，瓊脂糖凝膠電泳，凝膠分析掃描觀察到，HSG在高血壓搭橋患者和正常血壓搭橋患者WBC、血管組織和VSMCs的表達(dá)是有差別的：高血壓搭橋組較正常血壓搭橋組低（P<0.05）。相關(guān)性分析表明

10、：血管HSG表達(dá)與BMI、SBP、DBP之間存在著明顯的負(fù)相關(guān)。 [結(jié)論] 1.在高血壓冠心病患者和正常血壓冠心病患者之間，無(wú)論在WBC、VSMCs還是在血管組織，都存在HSG表達(dá)差別。 2.在血管組織中,HSG的表達(dá)與BMI、SBP和DBP呈負(fù)相關(guān)。 3.BMI與GLU、SBP和DBP都有明顯的正相關(guān)，提示超重和肥胖在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要的角色。 4.高血壓對(duì)心臟、肝臟和腎臟可能會(huì)造成