高壓氧結合自由基拮抗劑對大鼠肝臟基質金屬蛋白酶-2表達及活性的影響.pdf

1、目的:研究高壓氧結合自由基拮抗劑對大鼠肝組織基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表達和活性的影響,并探討影響MMP-2表達和活性的介導因素.方法:采用皮下注射CCl<,4>建立大鼠肝纖維化模型.60只Wistar雄性大鼠隨機分為(1)正常對照組(C)(2)模型組(M)(3)高壓氧組(H)(4)自由基拮抗劑組(Fr)(5)高壓氧結合自由基拮抗劑組(HFr),分別在模型建立的第2周和第8周給

2、予各處理因素,持續(xù)1周后處死動物.檢測大鼠血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平(比色法)、MMP-2活性(酶圖法),采用SP免疫組化方法檢測MMP 2、轉化生長因子(transforming growth factor-β<,1>,TGF-β<,1>)及金屬硫蛋白(metallothionein,MT)在肝組織中變化及分布情況,并進行半定量分析比較,常規(guī)石蠟切片,蘇木素-伊紅染色觀察肝組織病理學變化,應用RT-PCR

3、檢測各組大鼠肝組織MMP-2的基因表達.結果:病理組織學檢查證實本次實驗大鼠肝纖維化模型復制成功.首次干預后(2周末),高壓氧結合自由基拮抗劑組大鼠肝重指數及肝損傷指數較模型組為輕(P<0.01);肝組織MMP-2蛋白表達及mRNA水平、血清MMP-2活性均較模型組為低(MMP-2陽性指數:M,56.75±3.03;HFr,5.40±1.34;P<0.01.MMP-2 mRNA:M,0.547±0.013;HFr,0.155±0.005

4、;P<0.01.酶活性:M,10.47±2.23;HFr,1.07±0.73;P<0.05);高壓氧結合自由基拮抗劑組肝組織TGF-β<,1>表達強度低于模型組,M蛋白表達及血清MDA水平均較高壓氧組低,有顯著差異(TGF-β1陽性指數:M,4.96±0.28;HFr,3.28±0.33;P<0.01.MT:H,42.44±5.93;HFr,16.57±2.20;P<0.01.MDA:H,11.798±5.439;HFr,6.303±2

5、.430;P<0.05).再次干預后(8周末),高壓氧結合自由基拮抗劑組大鼠肝重指數及肝纖維化程度較模型組為低,差異顯著(P<0.01);亦明顯低于其他治療組;肝組織MMP-2蛋白表達及mRNA水平均較模型組為低,而血清MMP-2活性較模型組為高(MMP-2陽性指數:M,106.57±5.54;HFr,12.53±2.51;P<0.01.MMP-2 mRNA:M,0.685±0.014;HFr,0.506±0.013;P<0.01.酶活

6、性:M,4.29±1.13;HFr,9.60±2.32;P<0.05.)肝組織TGF-β<,1>、MT蛋白表達及血清MDA水平與2周末變化相似.(TGF-β<,1>陽性指數:M,7.76±0.39;HFr,4.97±0.35;P<0.01.MT陽性指數:H,49.92±6.04;HFr,6.50±2.29;P<0.01.MDA:M,14.346±2.579;HFr,6.863±2.822;P<0.05).單用高壓氧組實驗2周末及8周末,

7、肝臟病變略輕于模型組,組織學半定量無統(tǒng)計學意義,而血清MDA及肝組織MT在各組中為最高值,略高于模型組,血清MMP-2酶活性高于正常對照組.自由基拮抗劑組在2周末顯示肝損傷程度、MMP-2蛋白表達及酶活性、TGF-β<,1>蛋白表達均較模型組為低,MDA、MT為各治療組中最低值;此外還發(fā)現本組在8周末肝纖維化程度與高壓氧組相當,MMP-2酶活性高于模型組.結論:1.高壓氧結合自由基拮抗劑能減輕肝損傷,延緩肝纖維化的進展;2.高壓氧結合自

8、由基拮抗劑在實驗2周末使肝組織MMP-2蛋白表達下降,mRNA水平下降,血清酶活性下降,在實驗8周末使肝組織MMP-2蛋白表達下降,mRNA水平下降,血清酶活性升高,總效應抑制表達,但存在程度差異.損傷階段使MMP-2酶活性維持在低水平,減少HSCs周圍Ⅳ膠原降解,抑制HSCs的活化;肝纖維化的發(fā)展階段,使得MMP-2活性升高,增加Ⅳ膠原降解,有助于減少ECM沉積;3.各實驗組TGF-β<,1>蛋白表達變化趨勢與MMP-2表達一致,提示